侵染水鬼蕉和花朱顶红的番茄斑萎病毒属病毒的电镜和DAS-ELISA诊断

方琦; 董家红; 丁铭; 尹跃艳; 张丽珍; 李婷婷; 苏晓霞; 李展; 张仲凯; 《园艺学报 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：从昆明市郊区采集到呈同心圆褪绿环斑、褐色枯斑症状的水鬼蕉[Hymenocallis littoraris(Jacq.)Salisb.]和花朱顶红[Hippeastrum vittatum(L’Hér.)Herb.]植株,采用电子显微镜技术和DAS-ELISA进行检测,在水鬼蕉和花朱顶红病叶分离物SGJ-KM和ZDH-KM的粗汁液和超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒粒体存在,该病毒粒子为球形,直径80～85nm;病叶汁液与Tospovirus中的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)的复合抗血清呈阳性反应。通过形态学及血清学方法检测表明,侵染水鬼蕉和花朱顶红的病毒分离物SGJ-KM和ZDH-KM为Tospovirus的病毒分离物。

关键词： 水鬼蕉 花朱顶红 粒子形态 番茄斑萎病毒属 DAS-ELISA

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云南香料烟花叶病病原分离物的鉴定

苏晓霞; 李婷婷; 何跃锋; 李光西; 董家红; 丁铭; 方琦; 张丽珍; 李展; 张仲凯; 《西南农业学报 》 2007 CSCD

摘要：从云南保山采集具典型花叶症状的香料烟病株,用病株汁液接种心叶烟,进行单斑分离纯化。电子显微镜观察到杆状病毒粒体(18nm×300nm),三抗体夹心酶联免疫吸附(TAS-ELISA)检测与烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)抗血清呈阳性反应;用TMV外壳蛋白(CP)基因特异性引物进行RT-PCR扩增,克隆,经序列测定分析,侵染云南保山香料烟的病原分离物CP基因含480个核苷酸,编码159个氨基酸,通过核苷酸和氨基酸序列分析,与TMV-152的相似性最高,核苷酸序列的相似性为98.8%,推导编码氨基酸相似性达到100.0%,亲缘关系最近。根据这些特性,引起云南保山香料烟花叶病的病原分离物是烟草花叶病毒的一个分离物。

关键词： 香料烟 烟草 花叶病毒 鉴定

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云南甘蔗花叶病原的电镜诊断

方琦; 李文凤; 丁铭; 董家红; 李婷婷; 张丽珍; 苏晓霞; 李展; 张仲凯; 《电子显微学报 》 2005

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侵染马铃薯的一个Tospovirus混合分离物的鉴定、纯化及多抗血清制备

丁铭; 张丽珍; 方琦; 李婷婷; 苏晓霞; 李展; 张仲凯; 《西南农业学报 》 2004 CSCD

摘要：在昆明地区栽培的马铃薯病株上分离鉴定出含有番茄斑萎病毒属(Tospovirus)番茄斑萎病毒(Tomatospotted wilt virus,ISWV)和花生环斑病毒(Groundnut ringspot virus,GRSV)。利用蔗糖垫及差速离心法提纯了该混合分离物,提纯病毒免疫家兔5次,得到TSWV和GRSV的混合抗血清,所制备的抗血清经间接ELISA测定效价为1:2560。

关键词： 马铃薯 TSWV GRSV 抗血清

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大花蕙兰(Cymbidium faberi)花叶病病原的电镜诊断

丁铭; 方琦; 李婷婷; 张丽珍; 苏晓霞; 李展; 张仲凯; 《电子显微学报 》 2004

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TSWV与TMV复合侵染大花蕙兰的细胞病理

张仲凯; 方琦; 丁铭; 李婷婷; 彭潞波; 张丽珍; 李展; 苏晓霞; 《西南农业学报 》 2004 CSCD

摘要：应用超薄切片法制样电子显微镜观察,对番茄斑萎病毒(TSWV)和烟草花叶病毒(17MV)复合侵染的大花蕙兰同一病叶的细胞病理进行了研究。结果表明:无症的叶部其亚细胞结构较完整,在叶绿体旁及细胞质中有少量的TWV聚集块;在表现为花叶的部位亚细胞器不同程度病变,TMV粒体聚集或散布于细胞质中;在表现为黄化的叶部亚细胞大部分崩解,有的细胞中大量聚集或散布TMV粒体,有的细胞中则散布或聚集TSWV粒体,且在细胞质中出现病毒基质或空泡囊状结构,TSWV被膜粒体散布或聚集于细胞壁中,有的韧皮部细胞中充满纤维状内含体。

关键词： 番茄斑萎病毒 烟草花叶病毒 大花蕙兰 细胞病理

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番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒在云南的发生分布研究初报

张仲凯; 丁铭; 方琦; 张丽珍; 李婷婷; 彭潞波; 苏晓霞; 李展; 《西南农业学报 》 2004 CSCD

摘要：应用电子显微镜观察形态学及细胞病理特征,间接酶联免疫吸附测定(I-ELISA)和双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA),部分样品经番茄斑萎病毒(TSWV)核壳体蛋白基因(N-gene)的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增,以及部分样品的生物学回接测定的方法,对采自云南不同地区20种寄主植物上204份疑似Tospovirus侵染的病株样品进行了检测。结果表明,共有20种寄主作物139份样品中含有Tospovirus分离物,从检出样品的分布看,云南全省均有分布,但在海拔2400m以上的地区其症状表现不明显。Tospovirus云南分离物在血清型、细胞病理特征以及寄主范围方面与国内外报道的同属病毒有共同的特征,同时也有较明显的差异,即云南存在有Tospovirus新的株系或种类。

关键词： 番茄斑萎病毒属 云南分离物 发生分布

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