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水稻酵母双杂交文库构建及PID2胞内结构域互作蛋白的筛选
《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了进一步挖掘水稻PID2胞内互作蛋白质，阐明Pid2介导的稻瘟病抗性机制。本研究利用SMART技术，构建了受稻瘟病诱导后不同时间段的含抗性基因Pid2水稻材料的cDNA文库；通过PCR扩增获得PID2胞内结构域编码片段Pid2-JM，构建了诱饵表达载体pGBK-Pid2-JM，并进一步利用酵母双杂交技术筛选Pid2-JM的互作蛋白。结果表明，构建的cDNA酵母文库细胞密度为9.0×10~7Cells/mL，文库插入片段在500～2 000 bp之间，重组率为100%，诱饵载体无自激活活性；利用诱饵载体经筛选文库后，新发现一个能与Pid2-JM互作的U-box类E3泛素连接酶PBP1，经回转试验验证了PBP1与Pid2-JM可在烟草细胞内互作。综上，本研究成功构建了稻瘟病诱导下的水稻酵母双杂交文库，并筛选到一个能与PID2胞内结构域互作的U-box类E3泛素连接酶，该结果为进一步揭示水稻抗稻瘟病信号转导机制提供参考。
关键词： 稻瘟病 酵母双杂交 Pid2 互作蛋白 E3泛素化连接酶
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水稻抗稻瘟病基因Bsr-d1的SNP区域在地方品种中的变异分析
《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为揭示地方水稻品种中稻瘟病持久抗性基因Bsr-d1序列变异类型,本研究以收集到的缅甸、老挝和越南共79份地方水稻品种为供试材料,设计抗稻瘟病Bsr-d1基因特异引物对Bsr-d1基因启动子功能位点区段进行PCR扩增及测序分析。研究表明,79份地方水稻均持有抗稻瘟病Bsr-d1或bsr-d1等位基因,品种间存在18个变异位点和22个碱基的差异,根据差异所有品种可归为6种单倍型,其中H4和H6为优势单倍型,分别占测试品种的20.25%、58.23%;6种单倍型中仅H3单倍型携带抗性位点,有8个材料归为此类型,占10.13%。缅甸地方品种拥有H120（15.79%）、H220（2.63%）、H320（13.16%）、H420（18.42%）、H620（50%）等5种单倍型,优势单倍型为H6;老挝地方品种有H120（2.56%）、H320（7.69%）、H420（23.08%）、H520（2.56%）、H620（64.10%）205种单倍型,H6为优势单倍型,表明缅甸、老挝间在单倍型种类和抗性品种比例上均存在一定差异。本研究结果表明缅甸、老挝水稻资源携带持久抗性基因Bsr-d1的品种比例远高于中国品种,对中国选育稻瘟病持久抗性品种具有重要的利用价值,应加强对该地区种质的引进和分析评价。
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中国部分水稻品种Bsr-d1启动子稻瘟病持久抗性位点序列分析
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为发掘稻瘟病种质资源持久抗性基因Bsr-d1,本研究对来源中国的210份稻种Bsr-d1基因启动子功能片段511个碱基序列进行了比对分析。结果发现品种间存在18个变异位点28个碱基的差异,根据差异所有品种可归为7种单倍型,其中H4和H6为优势单倍型,分别占测试品种70.48%和23.81%;云南地方品种拥有H1、H2、H3、H4、H5、H6等6种单倍型,优势单倍型为H4 (51.95%)、H6 (35.06%);选育品种有3种单倍型,分别为H4、H6、H7、H6为优势单倍型,地方品种单倍型较选育品种丰富。其他地区品种仅发现H4(1.52%)和H6 (98.48%) 2种单倍型,云南省单倍型更为多样丰富。7种单倍型中仅H1单倍型(占1.43%)携带抗性位点,仅3个云南地方品种出现该单倍型,说明中国地方品种和选育品种中均缺乏Bsr-d1稻瘟病持久抗性基因。本研究结果为寻找和发掘持久抗稻瘟病基因Bsr-d1提供了线索。
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