大麻叶片基因组DNA快速提取方法与应用

张庆滢; 李磊; 段慧婷; 吕品; 郭蓉; 许艳萍; 郭鸿彦; 杨明; 《江西农业学报 》 2023

摘要：为满足大麻植物分子检测鉴定与大批量育种材料的分子标记辅助筛选、基因克隆、测序等需要,以改良的CTAB法为对照,通过对碱裂解法、TPS缓冲液法、TE缓冲液法等快速提取方法进行对比与优化,对可能影响DNA提取产量及质量的影响因素进行了分析,确定了提取液的组成及用量、样本量与采集方法、提取过程中各步骤操作与所需时间、保存时间及应用范围等技术参数,建立了一套微量、高效、快速的大麻叶片基因组DNA提取方法,即利用简易打孔器取2个直径为0.5 cm的叶片放入2 mL 的离心管中,加入300 μL的TE提取液(10 mmol/L EDTA,150~200 mmol/L Tris-HCl)及2粒钢珠,快速震荡30 s,震荡后的样品在13000 r/min下离心1 min,取100~150 μL上清液于-18℃冷冻15 min,室温溶解后13000 r/min下离心1 min,可用于PCR扩增.该方法样品用量小、操作简单经济、用时短、效率高、易于大批量操作提取,使用安全,PCR扩增效果佳,可广泛应用于大麻分子鉴别与育种材料的分子标记辅助选择等.

关键词： 大麻 DNA提取 PCR 分子检测

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