科研产出
人工饲料和桑叶对家蚕机体3种代谢酶活性的影响
《河南农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为明确人工饲料和桑叶饲育对蚕体代谢酶活性的影响，自五龄起蚕开始用人工饲料和桑叶分组饲养家蚕，采用分光光度法检测家蚕中肠组织和血淋巴中碱性磷酸酶（ALP）、羧酸酯酶（CarE）和乙酰胆碱酯酶（AchE）的活性变化。结果显示，人工饲料组家蚕的血淋巴ALP活性无显著变化，而桑叶组血淋巴ALP活性呈现逐渐增强的趋势；在60 h和72 h，桑叶组的ALP活性显著高于人工饲料组。桑叶组和人工饲料组血淋巴CarE活性均随时间的延长逐渐增强，其中人工饲料组CarE活性略高于桑叶组，但差异不显著。在12 h和24 h，桑叶组血淋巴AchE活性略低于人工饲料组；在36 h，桑叶组血淋巴AchE活性开始升高，并且在48、60、72 h持续高于人工饲料组，AchE活性分别是人工饲料组的1.52、1.64、1.71倍。桑叶组家蚕中肠ALP活性在36 h开始显著高于人工饲料组，并随着时间的推移持续升高，在72 h，酶活性极显著高于人工饲料组，酶活性为人工饲料组的2.13倍。人工饲料组中肠CarE活性在24 h开始显著高于桑叶组，在60 h达到最高值，为桑叶组的2.61倍；在72 h,CarE活性有下降的趋势，但仍显著高于桑叶组。桑叶组家蚕中肠AchE活性在12 h开始显著高于人工饲料组，在24～48 h桑叶组AchE活性继续增强；在60、72 h,AchE活性极显著高于人工饲料组，分别为人工饲料组的2.68、2.84倍。综合分析可知，喂食人工饲料家蚕血淋巴和中肠ALP和AchE活性均显著低于桑叶组，而中肠CarE活性显著高于桑叶组，提示人工饲料在一定程度上影响家蚕的代谢生理，降低蚕体抵抗不良环境的能力。
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琥珀蚕丝腺转录因子基因AaSGF-1的克隆、原核表达及组织表达分析
《昆虫学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本研究旨在克隆琥珀蚕Antheraea assama丝腺转录因子基因AaSGF-1,分析其序列特征及表达模式并制备多克隆抗体,为探讨该基因的生理功能奠定基础.[方法]采用RT-PCR和RACE技术从琥珀蚕丝腺中克隆AaSGF-1的cDNA序列,并进行生物信息学分析;利用qPCR检测AaSGF-1在琥珀蚕5龄第4天幼虫不同组织(头、中肠、脂肪体、丝腺、血液、表皮)中的表达模式;构建原核表达质粒载体,在大肠杆菌Escherichia coli BL21中表达AaSGF-1,利用纯化的融合蛋白免疫新西兰兔子,获得高效的抗体.利用免疫荧光技术检测AaSGF-1在琥珀蚕蚁蚕丝腺和表皮及4龄幼虫丝腺中的表达情况.[结果]克隆了琥珀蚕AaSGF-1的cDNA序列(GenBank登录号:MK889510.1),开放阅读框(ORF)序列长1 050 bp,编码349个氨基酸残基,预测蛋白分子质量为38.8 kD,理论等电点(pI)为8.74.qPCR检测结果显示AaSGF-1在琥珀蚕5龄幼虫丝腺组织尤其是后部丝腺中高量表达,而在其他组织中几乎不表达.免疫荧光结果表明AaSGF-1在蚁蚕及4龄幼虫的丝腺中表达.[结论]本研究原核表达了琥珀蚕AaSGF-1,制备了多克隆抗体,证实了AaSGF-1在琥珀蚕幼虫的丝腺中高表达,为进一步研究该基因在琥珀蚕丝腺发育及丝蛋白合成中的作用奠定了基础.
关键词： 琥珀蚕 丝腺转录因子 基因克隆 原核表达 多克隆抗体 组织表达谱
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琥珀蚕孵化酶基因AaHE的克隆及启动子活性分析
《昆虫学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】琥珀蚕Antheraea assama具有典型的野蚕特征,蚕卵孵化不齐,严重影响琥珀蚕的室内规模化饲养。本研究旨在探究对琥珀蚕卵孵化起关键作用的孵化酶（hatching enzyme）基因及其启动子序列特征,为进一步选择合适的抑制剂或促进剂调节琥珀蚕卵的孵化奠定基础。【方法】采用RACE技术克隆琥珀蚕孵化酶基因的cDNA全长序列,对基因序列进行生物信息学分析;采用qRT-PCR检测琥珀蚕孵化酶基因在琥珀蚕不同发育天数卵中及5龄第3和4天幼虫不同组织（丝腺、马氏管、头、中肠、脂肪体、表皮、血液、精巢和卵巢）中的表达情况;采用染色体步移克隆琥珀蚕孵化酶基因的启动子序列,构建昆虫细胞重组表达载体转染家蚕Bombyx mori BmN细胞,检测琥珀蚕孵化酶基因启动子活性。【结果】获得了琥珀蚕孵化酶基因AaHE（GenBank登录号:KT336227.1）全长cDNA序列,长993 bp,编码294个氨基酸,预测蛋白质分子质量为33.7 kD,理论等电点为5.17。AaHE氨基酸序列含有一个信号肽和一个ZnMc结构域,AaHE是一种含有HExxH锌结合位点的锌依赖性蛋白水解酶,该类酶既是肽酶,同时又是一种消化酶。AaHE在琥珀蚕孵化前的卵及5龄幼虫中肠中特异性高表达,分别与AaHE的肽酶和消化酶的属性相吻合。AaHE启动子核心区存在多个转录因子结合位点,这可能与转录因子参与调节AaHE的表达有关。启动子活性分析表明,AaHE启动子在家蚕BmN细胞中能够启动EGFP基因的表达,具有明显的启动子活性。【结论】AaHE是锌依赖性蛋白水解酶,其启动子核心区存在多个转录因子结合位点。本研究为选择合适的抑制剂或促进剂调节琥珀蚕卵的孵化率提供了参考。
关键词： 琥珀蚕 孵化酶 RACE 表达谱 启动子活性 BmN细胞
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不同蜂花粉对西方蜜蜂蜂王浆主蛋白基因表达及蜂王浆产量、质量和组成的影响
《动物营养学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究不同蜂花粉对西方蜜蜂(Apis mellifera)蜂王浆主蛋白基因(mrjps)表达及蜂王浆产量、质量和组成的影响。选取蜂王、群势基本一致的意大利蜜蜂9群,随机分为3个组,每组3群蜜蜂:油菜花粉组,饲喂油菜花粉;土连翘花粉组,饲喂土连翘花粉;对照组,不饲喂花粉,自然采粉(主要为鬼针草花粉)。试验周期为2个月,试验时间为2017年9月中旬至11月中旬。利用凯氏定氮法和水解法分别检测油菜花粉、土连翘花粉和鬼针草花粉粗蛋白质含量和氨基酸组成与含量;每组选3只9日龄工蜂进行mrjp1～mrjp9和黄体基因e3(yellow-e3)相对表达量的检测;检测各组蜂王浆产量、质量及水溶性蛋白和氨基酸组成与含量。结果显示:3种蜂花粉粗蛋白质含量、总氨基酸含量均为油菜花粉>土连翘花粉>鬼针草花粉,且组间差异显著(P<0.05),3种蜂花粉单一氨基酸(组氨酸除外)含量也表现为油菜花粉>土连翘花粉>鬼针草花粉,且组间差异显著(P<0.05)。在9日龄工蜂头部,mrjp1、mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5和mrjp7相对高表达,mrjp6、mrjp8和mrjp9相对低表达,油菜花粉组、土连翘花粉组和对照组mrjp1、mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5和mrjp7的相对表达量之和分别占mrjps总相对表达量的99.94%、99.94%和98. 60%。与对照组相比,饲喂油菜花粉和土连翘花粉显著提高了mrjp1、 mrjp2、mrjp3、mrjp4、mrjp5、mrjp7和yellow-e3的相对表达量(P<0.05),且油菜花粉组上述基因的相对表达量显著高于土连翘花粉组(P<0.05);饲喂油菜花粉和土连翘花粉显著降低了mrjp6、mrjp8、mrjp9的相对表达量(P<0.05)。油菜花粉组蜂王浆产量最高,其次为土连翘花粉组,对照组最低,各组之间差异显著(P<0.05)。油菜花粉组和土连翘花粉组蜂王浆的质量与对照组相比无显著差异(P>0.05)。3组蜜蜂所产蜂王浆水溶性蛋白和氨基酸组成基本一致。综上所述,不同粗蛋白质含量的蜂花粉对西方蜜蜂mrjps基因的表达及蜂王浆产量的影响不同,对蜂王浆质量和组成的影响不大。3组蜂群相比,采食油菜花粉组具有营养功能的mrjps基因的相对表达量和蜂王浆产量最高。由此可见,对于西方蜜蜂繁育或蜂王浆生产,油菜花粉可作为一种优质的营养饲料。
关键词： 蜂王浆 蜂花粉 王浆主要蛋白基因 粗蛋白质 氨基酸
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琥珀蚕胆绿素结合蛋白基因AaBP-1的克隆及表达分析
《蚕业科学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：鳞翅目昆虫的胆绿素结合蛋白属脂质运载蛋白家族,通过与胆色素(bilins)结合在蓝绿色素形成过程中发挥重要作用。从琥珀蚕(Antheraea assama)丝腺中克隆了胆绿素结合蛋白基因1(AaBP-1),该基因cDNA全长923 bp,开放阅读框609bp,编码202个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量为22.1 kD,理论等电点为5.19,蛋白序列含有1个信号肽和1个Lipocalin超家族结构域。序列比对分析结果表明,AaBP-1的氨基酸序列与柞蚕胆绿素结合蛋白BP-1一致性较高,达到81.7%。荧光定量PCR检测结果显示AaBP-1基因mRNA在琥珀蚕5龄第4天幼虫的表皮和丝腺中高量表达,在头和中肠中少量表达,其他组织中都几乎不表达。在丝腺中,AaBP-1主要在前部丝腺和中部丝腺表达,尤其在中部丝腺的前部大量表达,且琥珀蚕丝腺的颜色也呈现出中部丝腺比后部丝腺深的现象。推测AaBP-1可能参与琥珀蚕表皮、丝腺及茧中色素的形成。研究结果将为进一步研究琥珀蚕色素形成机制提供参考。
关键词： 琥珀蚕 胆绿素结合蛋白 基因克隆 序列分析 表达谱
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琥珀蚕内参基因的克隆及表达稳定性检测
《蚕业科学 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：琥珀蚕(Antheraea assama)是一种重要的野蚕种质资源。为了开展琥珀蚕功能基因的研究,选择合适的内参基因非常必要。通过c DNA末端快速扩增技术获得琥珀蚕功能基因研究的3个常用内参基因β-actin、GAPDH和18S rRNA的c DNA全长序列,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析3个基因在蚕体不同组织中的转录水平,并利用标准化分析软件ge Norm和Norm Finder分析其表达的稳定性。结果显示,3个内参基因的表达稳定性依次为β-actin、GAPDH、18S rRNA。就组织表达而言,β-actin在幼虫的中肠、脂肪体、马氏管、气孔、丝腺和卵巢以及蛹的输卵管中表达相对稳定;就发育时期的表达而言,β-actin在蛾期的表达也相对稳定。此外,GAPDH在幼虫头部、表皮和血液中的表达相对稳定;18S rRNA在幼虫精巢中的表达相对稳定。对琥珀蚕功能基因表达进行qRT-PCR所需内参基因数量的分析表明,选用2个内参基因即可满足试验需求。
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利用硫氰酸锂水溶液提取云南琥珀蚕茧壳丝蛋白的适宜条件研究
《山东农业科学 》 2017
摘要：琥珀蚕(Antheraea assama)是一种具有重要利用价值的经济昆虫,其蚕丝特性优良,在纺织、生物医药、生物材料等领域有较好的开发利用潜力。本研究利用硫氰酸锂水溶液提取琥珀蚕茧壳丝蛋白,结果表明:部分琥珀蚕丝蛋白可得到提取,且提取效率随提取温度的升高而提高。在设置的最高水浴温度60℃条件下提取12 h后得到的蛋白浓度为10.257 mg/mL,溶解率为8.91%;在60℃溶解条件下进行超声处理(53 kHZ,500W)12 h,蛋白浓度为14.552 mg/mL,溶解率达16.93%。SDS-PAGE凝胶电泳检测提取的丝蛋白,显示不同处理条件下提取的丝蛋白条带无明显差异,丝蛋白无明显降解。提取的丝蛋白在浓度和质量上都可满足实验室研究的需要。
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家蚕红色卵致死突变Fuyin-lre的性状特点与遗传分析
《西南农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了解发现于云南家蚕种质资源"芙印"系统红色卵致死突变Fuyin-lre的性状特点和遗传性。【方法】观察Fuyinlre的卵形、卵色、胚胎发育及孵化情况,并与正常卵系统P50、突变红色卵标志系统re开展杂交、回交等遗传分析试验。【结果】Fuyin-lre系统出现全紫褐色卵、紫褐色卵与红色卵并存的2种蛾区,紫褐色卵能正常孵化发育,而红色卵稍透明,常会出现不规则的条状或块状的黑斑,胚胎发育至丙1时,停止发育不孵化,与已研究报道的红色卵突变re、ci、rec、b-4、ru等存在明显的差异而与rel相似;Fuyin-lre系统与P50杂交F_1代均为紫褐色卵,F_2代与BC_1代出现紫褐色卵∶红色卵为3∶1的突变蛾区,所有紫褐色卵能正常孵化发育而红色卵不孵化;Fuyin-lre系统与re的F_1、F_2和BC_1均会出现红色卵突变蛾区,依交配方式的不同,突变蛾区中有全红色卵、1/2红色卵和1/4红色卵等多种表现形式,其中红色卵存在正常孵化、孵化1/2或孵化3/4等差异。【结论】Fuyin-lre突变发生于re基因所在的第5染色体上,受隐性基因控制,纯合致死,遵循孟德尔遗传规律。
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变温饲育对家蚕品种菁松×皓月生产性能的影响
《贵州农业科学 》 2016
摘要：为探明在云南早春和晚秋昼夜温差大,且平均气温较低的自然温度条件下饲养家蚕的可行性,以现行家蚕品种菁松×皓月正反交为材料,参照自然气象数据设置变温(13~28℃)饲养条件,以家蚕恒温(26~27℃)饲养为对照,研究变温条件下家蚕幼虫的发育情况及健康性、产茧量、茧丝质量等生产性能表现。结果表明:变温处理家蚕幼虫行为随温度变化表现不一,在较低温度时不活泼、食桑缓慢或停止活动,偶尔有个体出现轻微吐液现象;随温度升高,家蚕幼虫逐渐恢复活跃性和取食速度,吐液现象消失,能完成蜕皮、老熟结茧等生命活动。变温处理各个龄期较恒温处理长1~2d,全龄经过时间延长约10d;13~28℃变温处理对家蚕健康性、产茧量、茧丝质量等均有不良影响。
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