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甘油-3磷酸转酰酶氨基酸与植物抗冷性关系初探
《云南植物研究 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：甘油 - 3磷酸转酰酶 (GPAT)与植物抗冷性密切相关。南瓜 (Cucurbitamoschata)与黑子南瓜 (Cucurbitaficifolia)同属不同种 ,亲缘关系较近 ,但却存在显著的抗冷性差异。南瓜及黑子南瓜GPAT基因的克隆 ,可以使我们从二者推导的有限氨基酸的差异中对GPAT氨基酸组成及其与植物抗冷性作一定的探讨。发现在南瓜与黑子南瓜 13个不同的氨基酸残基中有 3个与抗冷性植物拟南芥菜 (Arabidopsisthaliana)、豌豆 (Pisumsativum)、红花 (Carthamustincto rius)和菠菜 (Spinaciaoleracea)等相同 ,可能与黑子南瓜比南瓜更具抗冷性的原因有关。比较南瓜、黑子南瓜、豌豆、红花、拟南芥菜和菠菜等植物中GPAT基因推导的氨基酸序列发现 ,在比较抗冷的拟南芥菜、红花、豌豆和菠菜等植物中 ,虽然它们之间的亲缘关系都比较远 ,但某些位点上的氨基酸残基却完全相同 ,而与南瓜等抗冷性较差的植物不同 ,这些位点的氨基酸残基可能也与GPAT对底物酰基的选择性有关。
关键词： 甘油-3磷酸转酰酶(GPAT) 抗冷性 氨基酸
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不同抗冷性水稻中编码甘油-3-磷酸转酰酶的部分cDNA的序列比较研究
《云南植物研究 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：采用RT -PCR技术 ,以根据国外报道的几种双子叶植物的甘油 - 3-磷酸转酰酶的相对保守的氨基酸序列而设计的简并引物作为扩增引物 ,从不同抗冷性水稻品种中均扩增到一段约 315bp的cDNA片段。测序结果表明它们都是编码GPAT的部分cDNA ,含有 315个核苷酸 ,编码 10 5个氨基酸。比较它们之间的核苷酸及推导氨基酸序列 ,发现有一定差异 ,且抗冷性相差越大的品种间差异越大。抗冷性的差异可能与脯氨酸的替换有关。
关键词： 甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT) cDNA序列比较 抗冷性 水稻
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黑子南瓜甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析
《云南植物研究 》 1999 北大核心 CSCD
摘要：依据国外报道的南瓜甘油－３－磷酸转酰酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ序列合成相应引物，用ＲＴ－ＰＣＲ技术，成功地分离了黑子南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｆｉｃｉｆｏｌｉａ）ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段，并亚克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上，序列分析表明黑子南瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ序列及递推的氨基酸序列与南瓜（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍｏｓｃｈａｔａ）相比分别具有９８％和９６５％的同源性。在１１８８ｂｐ中有２２个核苷酸发生变化，导致１３个氨基酸的改变
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水稻中编码甘油-3-磷酸转酰酶部分cDNA的克隆及序列分析
《云南植物研究 》 1998 北大核心 CSCD
摘要：参照国外报道的几种双子叶植物的甘油－３－磷酸转酰酶的相对保守的氨基酸序列，设计并合成一对简并引物，提取抗冷性强的水稻品种“丽梗２号”的ＲＮＡ，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，扩增出了３１５ｂｐ的一段ｃＤＮＡ片段。扩增产物经纯化后直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统中，经ＰＣＲ法鉴定，所得的重组质粒中含有３１５ｂｐ的片段。证明已克隆到水稻甘油－３－磷酸转酰酶部分ｃＤＮＡ。采用双链双脱氧法定序分析，表明所克隆的该段ｃＤＮＡ序列与国外所报道的双子叶植物的该段ｃＤＮＡ的核苷酸序列及氨基酸序列的同源性均达到７０％以上，提示了该基因在进化上具有一定的保守性。
关键词： 甘油－3－磷酸转酰酶（GPAT），聚合酶链式反应（PCR），基因克隆，水稻
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简并引物在PCR扩增甘油-3-磷酸转酰酶基因中的应用
《云南植物研究 》 1998 北大核心 CSCD
摘要：应用高简并引物，结合ＰＣＲ扩增技术从南瓜Ｃｕｃｕｒｂｉｔａｍｏｓｃｈａｔａ总ＲＮＡ的逆转录产物中得到了ＧＰＡＴ基因保守区。在ＰＣＲ反应中，简并引物之间的浓度配比是影响扩增效率的关键。用脱氧次黄苷（ｄＩ）替代简并引物中的高简并位点，可大幅度降低简并程度，显著提高扩增产物的特异性及扩增效率。
关键词： 简并引物，聚合酶链式反应（PCR），甘油－3－磷酸转酰酶（GPAT）
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用保守氨基酸区段序列分离克隆几种云南高原作物GPAT基因cDNA片段
《遗传 》 1998 北大核心
摘要：用分子生物学技术分别成功地从南瓜及黑子南瓜、水稻、油菜中得到了ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ片段中约３１５ｂｐ的片段，并用Ｔ４连接酶分别克隆到了ｐＧＥＭＴ载体系统上。这一片段在不同科的植物中其片段大小并无差别，但限制性酶切表明其内部序列确实存在有差异。从南瓜中得到的ＧＰＡＴｃＤＮＡ部分片段经ＨｉｎｄⅢ酶切，得到了一个约１００多ｂｐ和一个约２００ｂｐ的片段，与前人所发表的南瓜ＧＰＡＴｃＤＮＡ序列（在该片段的１１１ｂｐ处有一个ｈｉｎｄⅢ的酶切位点）相符。
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豌豆中GPAT基因编码cDNA的克隆及分析(英文)
《云南大学学报(自然科学版) 》 1998 CSCD
摘要：参照国外报道的豌豆ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，通过ＲＴＰＣＲ技术，从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了ＧＰＡＴ基因的编码ｃＤＮＡ片段，并将其纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，经ＮｃｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切鉴定，所得的重组质粒中含有１３８０ｂｐ左右的片段．采用ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶进行酶切，酶切图谱分析表明所克隆的豌豆ＧＰＡＴ基因编码ｃＤＮＡ的酶切图谱与国外所报道的该基因ｃＤＮＡ的酶切图谱一致，暗示了该基因在进行上具有一定的保守性．
关键词： 甘油-3-磷酸转酰酶基因，聚合酶链式反应，基因克隆，豌豆
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南瓜甘油-3-磷酸转酰酶基因cDNA的克隆及限制性图谱分析
《云南大学学报(自然科学版) 》 1998 CSCD
摘要：依据国外有关文献，采用ＲＴ－ＰＣＲ技术成功地从南瓜子叶中分离了甘油－３－磷酸酰基转移酶（ＧＰＡＴ）基因的ｃＤＮＡ片段并克隆到了ｐＧＥＭ－Ｔ载体系统的多克隆位点上．限制性内切酶分析表明确属该基因．ＧＰＡＴ对植物的抗冷性有着重要的作用，该基因的克隆为进一步研究该酶和该基因及其与植物抗冷性关系迈出了第一步
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半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用
《云南大学学报(自然科学版) 》 1998 CSCD
摘要：常规ＰＣＲ方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用，但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是１００％，一旦引物序列与目的基因间存在有差异，便往往会导致扩增的特异性不强，扩增效率不高，给克隆带来很大的困难．在常规ＰＣＲ基础上，若所分离的基因在不同植物间存在保守序列，依据这一序列再合成一对引物，进行半套式ＰＣＲ则能大大提高扩增的特异性及扩增效率．对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆．本文依据南瓜ＧＰＡＴ（甘油－３－磷酸酰基转移酶）基因ｃＤＮＡ序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段为例来说明半套式ＰＣＲ技术在植物基因克隆中的应用
关键词： 半套式PCR，基因克隆，应用
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