科研产出
肾茶叶枯病病原的分离与鉴定
《热带生物学报 》 2023
摘要：为了确定肾茶叶枯病致病病原菌，笔者从肾茶云南产区采集的肾茶叶枯病样本中分离到1株病原菌，并对其进行了病害症状观察，病原菌分离、鉴定和病原菌生物学特性研究。结果表明，其在PDA培养基上菌落为白色，气生菌丝发达，菌落初期下部淡粉色，后期为深黄棕色，分生孢子顶胞钩状，成熟的大型分生孢子有3～5个隔膜。将病原菌离体接种到健康肾茶叶片，保湿培养数天后接种部位出现黑褐色病斑，与田间症状一致。病原菌基因组DNA经真菌rDNA-ITS通用引物ITS1/ITS4扩增及同源性分析，病原菌与Fusarium nematophilum,Fusarium equiseti,Fusarium chlamydosporum,Fusarium longipes聚为一支，核酸序列同源性为99.40%～99.60%。结合形态特征观察、ITS序列分析及柯赫氏法则验证结果，初步确定该病原菌为镰刀菌。
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家蚕BmNPV压力选择品系的细菌病发生及其病原分离鉴定
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】调查鉴定核型多角体病毒（BmNPV）压力选择家蚕相关品系细菌病发病原因，为蚕作生产上家蚕抗Bm NPV品种细菌病防治提供理论依据。【方法】相同批次和饲养条件下，对BmNPV压力选择自建品系P50Nn（n表示代）和抗Bm NPV品种4个母种品系苏N、菊N、明N、虎N的正常保种组发生家蚕细菌病情况进行初步调查，分离培养病蚕肠道细菌，开展16S rDNA分子鉴定、革兰氏染色和扫描电镜等形态学鉴定，以及糖发酵、吲哚试验等20项生化鉴定。【结果】细菌病导致家蚕BmNPV压力选择品系添食BmNPV第3代次的P50N3结茧率为47.63%，抗BmNPV育种母种品系添食BmNPV多代次的菊N结茧率最低为34.72%，而未添食过BmNPV的对照品系P50结茧率为96.15%,P50N3和菊N结茧率与P50呈极显著差异（P＜0.01）。病蚕肠道细菌经过多次分离纯化，显微镜观察球状细菌较多；分子鉴定后获得肠球菌属（Enterococcus）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter）、沙雷氏菌属（Serratia）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、假单胞菌属（Pseudomonas）和肠杆菌属（Enterobacter）等7类细菌属，其中葡萄球菌属占比（30.00%）最高，其次为肠球菌属和沙雷氏菌属，均为16.67%。选择分子鉴定一致性最高的8株不同细菌，进一步进行形态学鉴定和生化鉴定，与分子鉴定结果一致。【结论】家蚕BmNPV压力选择品系的细菌病发生主要由葡萄球菌、肠球菌和多种肠杆菌科细菌引起，在BmNPV压力选择早期家蚕细菌病发生更严重。
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低纬高原甘蔗锈病病原菌鉴定及系统进化分析
《西南农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确低纬高原云南蔗区甘蔗锈病病原种类、发生分布特征、病原间及其与柄锈菌属其他锈菌的系统进化关系.[方法]通过症状观察,病原形态特征观察和分子检测对采自云南不同蔗区的57份锈病样品进行病原鉴定;并构建NJ树分析甘蔗锈病病原与其他柄锈菌的系统进化关系.[结果]云南勐海海引1号4份锈病样品的夏孢子堆桔黄色,夏孢子梨形,栗褐色或金黄色,表面有刺,壁顶端加厚10 μm,大小为(25~50)μm×(16~35)μm,具4~5个芽孔.核苷酸序列与已报道的屈恩柄锈菌(GU058021)同源性在99.9%以上,表明这些锈病样品是由屈恩柄锈菌引起的甘蔗黄锈病;其余53份锈病样品的夏孢子堆棕红色,夏孢子球形,棕色至深棕色,表面布满小刺,壁四周均匀加厚,大小为(20~40)μm×(13~25)μm,芽孔多4个;侧丝无色,匙形.核苷酸序列与已报道的黑顶柄锈菌(GU058001)同源性在99.8%以上,表明这些锈病样品都是由黑顶柄锈菌引起的甘蔗褐锈病.系统进化树显示,文章获得的4条屈恩柄锈菌与Puccinia polysora(GU058024)聚为1组,遗传关系近;53条黑顶柄锈菌与P.nakanishikii(GU058002)、P.rufipes(AJ296545)、Aecidium deutziae(KU309317)和 P.coronata(DQ354526)等柄锈菌属锈菌聚为 1组,遗传关系近;而2种甘蔗锈病菌的遗传关系相对较远.[结论]在低纬高原云南蔗区首次发现引起甘蔗黄锈病的屈恩柄锈菌,并证实引起褐锈病的黑顶柄锈菌是低纬高原甘蔗锈病的主要病原.
关键词： 甘蔗锈病 病原鉴定 黑顶柄锈菌 屈恩柄锈菌 系统进化
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云南省荞麦茎枯病病原鉴定及其生物学特性研究
《西南农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】旨在明确云南省荞麦茎枯病的病原及其生物学特性，为该病害的科学防控提供理论依据。【方法】从采自云南澄江的荞麦上采用植物真菌组织分离法，通过观察病原形态特征、测定致病性及分析rDNA-ITS序列系统发育树，鉴定引起云南省荞麦茎枯病的病原种类，并研究其生物学特性。【结果】采自云南澄江荞麦基地的典型荞麦茎枯病症状样品上分离到与菌株M38形态一致的病原真菌。经形态学、致病性及分子生物学鉴定，菌株M38的rDNA-ITS序列长度为517 bp（登录号：KP205542.1）,与木贼镰刀菌菌株（MG736112.1和MG736187.1）的同源性均为100%,鉴定该病原菌为木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）。菌株M38的菌丝在培养基PDA和PSA上最适宜生长，菌落直径大小分别为61.69和57.93 mm;菌丝在25～30℃均适宜生长，最适宜生长的温度为28℃,菌落直径大小为61.23 mm,致死温度为65℃,10 min;菌丝在pH为8.0～10.0均适宜生长，最适宜生长的pH为8.0,菌落直径大小为68.60 mm;在连续黑暗条件下菌丝生长最快，菌落直径大小为59.55 mm;菌丝在可溶性淀粉为碳源的培养基上生长最快，菌落直径大小为66.55 mm;菌丝在硝酸钠为氮源的培养基上生长最快，菌落直径大小为71.16 mm。【结论】引起云南省荞麦茎枯病的病原菌为木贼镰刀菌（F.equiseti）;该菌株菌丝生长的最适培养基为PDA和PSA,温度为28℃,菌丝致死条件为65℃处理10 min, pH为8.0,光照条件为连续黑暗，碳源为可溶性淀粉，氮源为硝酸钠。
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桑树烟煤病的病原鉴定
《蚕业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：桑树烟煤病随着桑粉虱种群在蚕区流行为害,但桑树烟煤病病原尚不明确.根据科赫法则,应用形态学方法和ITS分子技术对桑树烟煤病病原菌进行分离、接种验证及鉴定.通过菌落形态、产孢结构特征、分生孢子类型与形成方式的描述,以及病原菌DNA序列比对分析,明确桑树烟煤病的病原菌MWx为枝孢菌属(Cladosporium)真菌,属座囊菌纲(Dothideomyce-tes)、煤炱目(Capnodiales)、小戴卫霉科(Davidiellaceae).该病原菌的鉴定为桑树烟煤病、桑粉虱综合防控研究奠定了工作基础.
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云南省珠芽魔芋(Amorphophallus bulbifer)软腐病病原菌鉴定
《植物病理学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：魔芋(Amorphophallus spp.)是我国西南地区广泛种植的一种重要经济作物.2016~2018年在云南省发现一种由细菌侵染引起的珠芽魔芋新病害,症状表现为茎秆或叶片出现水渍状病斑,茎秆软化下垂,根部及球茎腐烂变褐,甚至整株倒伏.根据病害发病症状,并通过菌落形状、致病性测定、Biolog和16S rDNA测序分析,结果显示该病原菌在LB培养基上菌落呈近圆形,中央隆起,淡奶油色,质地均匀,表面光滑发亮;扫描和透射电子显微镜下观察显示,菌体形态呈短杆状,周生鞭毛,两端稍钝圆;基于16S rDNA扩增序列系统进化分析与已报道的Pectobacterium aroidearum strain CL1904-3(MK875007)相似性达99%以上,构建的系统进化树表明与P.aroidearum菌株亲缘关系最近,Biolog测定和16S rDNA序列分析均将该病原菌鉴定为软腐果胶杆菌(P.aroidearum).这是我国首次报道由P.aroidearum引起的珠芽魔芋软腐病害.研究结果进一步加深了人们对该病害的认识,为其防治提供了科学依据.
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杜鹃炭疽病病原鉴定及其生物学特性研究
《江西农业学报 》 2018
摘要：从昆明市郊的杜鹃盆花种植基地采集炭疽病样品,经病原分离和纯化得到形态一致的6个菌株;通过形态学观察、分子生物学和致病性鉴定,将该杜鹃炭疽病的病原菌鉴定为博宁炭疽菌(Colletotrichum boninense)。研究了不同碳源、氮源、p H值、温度对该病原菌生长的影响,结果表明:该病原菌能有效利用多种碳源,最适合的为葡萄糖;有利于该病原菌生长的有机氮为蛋白胨,无机氮为硝酸钾;病原菌在15~35℃下均能生长,最适温度为25℃;适于病原菌生长的培养基p H值为6~8;适于产孢的培养基为MA培养基。
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滇重楼灰霉病及其病原鉴定
《中国中药杂志 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：灰霉病是滇重楼的主要病害之一,常引起滇重楼花器腐烂而导致种子绝收,该研究通过田间病害调查,掌握了该病发生的基本情况,通过带病组织和菌核培养分离获得病原菌,并依据柯赫氏法则验证其致病性.结果表明,病原菌分生孢子梗葡萄状分枝,分生孢子椭圆形,长9.70~13.70 μm,平均(11.32±0.82) μm,宽(7.05 ~9.12) μm,平均(8.24±0.48) μm,精孢子球形,直径(3.34±0.31) μm,病原菌在发病植株及PDA培养基上均易产生黑色菌核,基于形态特征鉴定病原菌为一种葡萄孢属Botrytis真菌.基于病原菌RPB2,HSP60,G3PDH基因及其联合基因构建的系统发育树,支持该病原菌为葡萄孢属真菌一个新种,该菌最适培养温度为20℃,最适pH为8,持续光照会抑制病原菌生长.
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滇重楼茎秆软腐病病原鉴定
《西南农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确滇重楼茎秆软腐病的病原,以期为该病的防治提供依据。【方法】通过田间调查采样,初步掌握滇重楼茎秆软腐病的发生规律,通过稀释分离、柯赫氏法则验证获得病原菌,基于形态特征和16S r DNA、gyr B、rpo B基因序列特征对病原菌进行鉴定。【结果】从发病植株上分离出1株细菌,经柯赫氏法则验证为滇重楼茎秆软腐病病原菌,基于形态和分子生物学特征将其鉴定为胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种Pectobacterium carotovorum subsp.carotovorum。【结论】胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种P.carotovorum subsp.carotovorum是滇重楼茎秆软腐病的病原菌。
关键词： 滇重楼 茎秆软腐病 病原鉴定 胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种
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云南香蕉细菌性软腐病病原鉴定
《云南农业大学学报(自然科学版) 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为了明确引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌,为该病害防控提供基础,在植蕉区采集香蕉细菌性软腐病病害标样,对病原菌进行分离、致病性测定、寄主范围测定、形态学观察、生理生化反应及16SrDNA序列分析.结果表明:分离获得的菌株均有致病性,病原菌形态特征、寄主范围、生理生化测定结果与Erwiniachrysanthemi相符.16SrDNA序列分析表明:代表性菌株的测序结果与E.chrysanthemi(序列登录号:GU811708)的同源性达到99%以上,系统发育树分析结果与之一致,表明引起云南香蕉细菌性软腐病的病原菌为菊欧氏杆菌(E.chrysanthemi),该病害是近年来发生在云南植蕉区的一种新病害.
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