科研产出
肾茶叶枯病病原的分离与鉴定
《热带生物学报 》 2023
摘要：为了确定肾茶叶枯病致病病原菌，笔者从肾茶云南产区采集的肾茶叶枯病样本中分离到1株病原菌，并对其进行了病害症状观察，病原菌分离、鉴定和病原菌生物学特性研究。结果表明，其在PDA培养基上菌落为白色，气生菌丝发达，菌落初期下部淡粉色，后期为深黄棕色，分生孢子顶胞钩状，成熟的大型分生孢子有3～5个隔膜。将病原菌离体接种到健康肾茶叶片，保湿培养数天后接种部位出现黑褐色病斑，与田间症状一致。病原菌基因组DNA经真菌rDNA-ITS通用引物ITS1/ITS4扩增及同源性分析，病原菌与Fusarium nematophilum,Fusarium equiseti,Fusarium chlamydosporum,Fusarium longipes聚为一支，核酸序列同源性为99.40%～99.60%。结合形态特征观察、ITS序列分析及柯赫氏法则验证结果，初步确定该病原菌为镰刀菌。
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家蚕BmNPV压力选择品系的细菌病发生及其病原分离鉴定
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】调查鉴定核型多角体病毒（BmNPV）压力选择家蚕相关品系细菌病发病原因，为蚕作生产上家蚕抗Bm NPV品种细菌病防治提供理论依据。【方法】相同批次和饲养条件下，对BmNPV压力选择自建品系P50Nn（n表示代）和抗Bm NPV品种4个母种品系苏N、菊N、明N、虎N的正常保种组发生家蚕细菌病情况进行初步调查，分离培养病蚕肠道细菌，开展16S rDNA分子鉴定、革兰氏染色和扫描电镜等形态学鉴定，以及糖发酵、吲哚试验等20项生化鉴定。【结果】细菌病导致家蚕BmNPV压力选择品系添食BmNPV第3代次的P50N3结茧率为47.63%，抗BmNPV育种母种品系添食BmNPV多代次的菊N结茧率最低为34.72%，而未添食过BmNPV的对照品系P50结茧率为96.15%,P50N3和菊N结茧率与P50呈极显著差异（P＜0.01）。病蚕肠道细菌经过多次分离纯化，显微镜观察球状细菌较多；分子鉴定后获得肠球菌属（Enterococcus）、葡萄球菌属（Staphylococcus）、柠檬酸杆菌属（Citrobacter）、沙雷氏菌属（Serratia）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、假单胞菌属（Pseudomonas）和肠杆菌属（Enterobacter）等7类细菌属，其中葡萄球菌属占比（30.00%）最高，其次为肠球菌属和沙雷氏菌属，均为16.67%。选择分子鉴定一致性最高的8株不同细菌，进一步进行形态学鉴定和生化鉴定，与分子鉴定结果一致。【结论】家蚕BmNPV压力选择品系的细菌病发生主要由葡萄球菌、肠球菌和多种肠杆菌科细菌引起，在BmNPV压力选择早期家蚕细菌病发生更严重。
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中国半夏主产地软腐病致病菌分离、鉴定及比较研究
《西南农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确中国半夏主产区软腐病病原菌种类及其致病力强弱,为半夏生产和病害防控提供理论依据.[方法]对全国半夏主产区软腐病危害情况进行调查,根据柯赫氏法则对全国半夏主产区软腐病病原菌进行分离、鉴定、致病性检测以及生物学特性研究,并通过离体叶片和离体块茎回接对分离鉴定得到的3种软腐病优势病原菌进行致病力比较分析,采用抑菌圈法对3种软腐病优势致病菌进行室内药剂筛选.[结果]中国半夏软腐病主要由果胶杆菌属(Pectobacterium)的胡萝卜软腐果胶杆菌(P.carotovorum,P.aroidearum)以及狄克氏菌属(Dickeya)的 D.fangzhongdai 引起,其中 P.carotovorum 和 P.aroidearum 分布较广,在全国4个半夏主产区中均可检测到,而D.fangzhongdai仅存在于湖北天门半夏产区.菌株致病力强弱为P.carotovorum>D.fangzhongdai>P.aroidearum,且 P.carotovorum、D.fangzhongdai 和 P.aroidearum 更容易从半夏叶片背面进行侵染.在不同条件下培养3种软腐病菌株,结果表明最适生长温度为28~30℃,最适pH为8.0.室内药剂筛选结果表明,26种不同类型杀菌剂中化学杀菌剂噻霉酮、二氯异氰尿酸钠和植物源杀菌剂乙蒜素对3种半夏软腐病优势致病菌株有显著抑制效果,EC50值均小于50μg/mL.[结论]半夏软腐病主要致病菌有P.carotovorum、P.aroidearumn和D.fan.gzhongdai,且P.carotovorum菌株致病力最强,噻霉酮、二氯异氰尿酸钠和乙蒜素对3种半夏软腐病有显著抑制效果.
关键词： 半夏 软腐病 病害调查 病原鉴定 致病力比较 药剂筛选
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低纬高原甘蔗锈病病原菌鉴定及系统进化分析
《西南农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确低纬高原云南蔗区甘蔗锈病病原种类、发生分布特征、病原间及其与柄锈菌属其他锈菌的系统进化关系.[方法]通过症状观察,病原形态特征观察和分子检测对采自云南不同蔗区的57份锈病样品进行病原鉴定;并构建NJ树分析甘蔗锈病病原与其他柄锈菌的系统进化关系.[结果]云南勐海海引1号4份锈病样品的夏孢子堆桔黄色,夏孢子梨形,栗褐色或金黄色,表面有刺,壁顶端加厚10 μm,大小为(25~50)μm×(16~35)μm,具4~5个芽孔.核苷酸序列与已报道的屈恩柄锈菌(GU058021)同源性在99.9%以上,表明这些锈病样品是由屈恩柄锈菌引起的甘蔗黄锈病;其余53份锈病样品的夏孢子堆棕红色,夏孢子球形,棕色至深棕色,表面布满小刺,壁四周均匀加厚,大小为(20~40)μm×(13~25)μm,芽孔多4个;侧丝无色,匙形.核苷酸序列与已报道的黑顶柄锈菌(GU058001)同源性在99.8%以上,表明这些锈病样品都是由黑顶柄锈菌引起的甘蔗褐锈病.系统进化树显示,文章获得的4条屈恩柄锈菌与Puccinia polysora(GU058024)聚为1组,遗传关系近;53条黑顶柄锈菌与P.nakanishikii(GU058002)、P.rufipes(AJ296545)、Aecidium deutziae(KU309317)和 P.coronata(DQ354526)等柄锈菌属锈菌聚为 1组,遗传关系近;而2种甘蔗锈病菌的遗传关系相对较远.[结论]在低纬高原云南蔗区首次发现引起甘蔗黄锈病的屈恩柄锈菌,并证实引起褐锈病的黑顶柄锈菌是低纬高原甘蔗锈病的主要病原.
关键词： 甘蔗锈病 病原鉴定 黑顶柄锈菌 屈恩柄锈菌 系统进化
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云南省荞麦茎枯病病原鉴定及其生物学特性研究
《西南农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】旨在明确云南省荞麦茎枯病的病原及其生物学特性，为该病害的科学防控提供理论依据。【方法】从采自云南澄江的荞麦上采用植物真菌组织分离法，通过观察病原形态特征、测定致病性及分析rDNA-ITS序列系统发育树，鉴定引起云南省荞麦茎枯病的病原种类，并研究其生物学特性。【结果】采自云南澄江荞麦基地的典型荞麦茎枯病症状样品上分离到与菌株M38形态一致的病原真菌。经形态学、致病性及分子生物学鉴定，菌株M38的rDNA-ITS序列长度为517 bp（登录号：KP205542.1）,与木贼镰刀菌菌株（MG736112.1和MG736187.1）的同源性均为100%,鉴定该病原菌为木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）。菌株M38的菌丝在培养基PDA和PSA上最适宜生长，菌落直径大小分别为61.69和57.93 mm;菌丝在25～30℃均适宜生长，最适宜生长的温度为28℃,菌落直径大小为61.23 mm,致死温度为65℃,10 min;菌丝在pH为8.0～10.0均适宜生长，最适宜生长的pH为8.0,菌落直径大小为68.60 mm;在连续黑暗条件下菌丝生长最快，菌落直径大小为59.55 mm;菌丝在可溶性淀粉为碳源的培养基上生长最快，菌落直径大小为66.55 mm;菌丝在硝酸钠为氮源的培养基上生长最快，菌落直径大小为71.16 mm。【结论】引起云南省荞麦茎枯病的病原菌为木贼镰刀菌（F.equiseti）;该菌株菌丝生长的最适培养基为PDA和PSA,温度为28℃,菌丝致死条件为65℃处理10 min, pH为8.0,光照条件为连续黑暗，碳源为可溶性淀粉，氮源为硝酸钠。
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桑树烟煤病的病原鉴定
《蚕业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：桑树烟煤病随着桑粉虱种群在蚕区流行为害,但桑树烟煤病病原尚不明确.根据科赫法则,应用形态学方法和ITS分子技术对桑树烟煤病病原菌进行分离、接种验证及鉴定.通过菌落形态、产孢结构特征、分生孢子类型与形成方式的描述,以及病原菌DNA序列比对分析,明确桑树烟煤病的病原菌MWx为枝孢菌属(Cladosporium)真菌,属座囊菌纲(Dothideomyce-tes)、煤炱目(Capnodiales)、小戴卫霉科(Davidiellaceae).该病原菌的鉴定为桑树烟煤病、桑粉虱综合防控研究奠定了工作基础.
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云南省珠芽魔芋(Amorphophallus bulbifer)软腐病病原菌鉴定
《植物病理学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：魔芋(Amorphophallus spp.)是我国西南地区广泛种植的一种重要经济作物.2016~2018年在云南省发现一种由细菌侵染引起的珠芽魔芋新病害,症状表现为茎秆或叶片出现水渍状病斑,茎秆软化下垂,根部及球茎腐烂变褐,甚至整株倒伏.根据病害发病症状,并通过菌落形状、致病性测定、Biolog和16S rDNA测序分析,结果显示该病原菌在LB培养基上菌落呈近圆形,中央隆起,淡奶油色,质地均匀,表面光滑发亮;扫描和透射电子显微镜下观察显示,菌体形态呈短杆状,周生鞭毛,两端稍钝圆;基于16S rDNA扩增序列系统进化分析与已报道的Pectobacterium aroidearum strain CL1904-3(MK875007)相似性达99%以上,构建的系统进化树表明与P.aroidearum菌株亲缘关系最近,Biolog测定和16S rDNA序列分析均将该病原菌鉴定为软腐果胶杆菌(P.aroidearum).这是我国首次报道由P.aroidearum引起的珠芽魔芋软腐病害.研究结果进一步加深了人们对该病害的认识,为其防治提供了科学依据.
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杜鹃炭疽病病原鉴定及其生物学特性研究
《江西农业学报 》 2018
摘要：从昆明市郊的杜鹃盆花种植基地采集炭疽病样品,经病原分离和纯化得到形态一致的6个菌株;通过形态学观察、分子生物学和致病性鉴定,将该杜鹃炭疽病的病原菌鉴定为博宁炭疽菌(Colletotrichum boninense)。研究了不同碳源、氮源、p H值、温度对该病原菌生长的影响,结果表明:该病原菌能有效利用多种碳源,最适合的为葡萄糖;有利于该病原菌生长的有机氮为蛋白胨,无机氮为硝酸钾;病原菌在15~35℃下均能生长,最适温度为25℃;适于病原菌生长的培养基p H值为6~8;适于产孢的培养基为MA培养基。
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滇重楼灰霉病及其病原鉴定
《中国中药杂志 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：灰霉病是滇重楼的主要病害之一,常引起滇重楼花器腐烂而导致种子绝收,该研究通过田间病害调查,掌握了该病发生的基本情况,通过带病组织和菌核培养分离获得病原菌,并依据柯赫氏法则验证其致病性.结果表明,病原菌分生孢子梗葡萄状分枝,分生孢子椭圆形,长9.70~13.70 μm,平均(11.32±0.82) μm,宽(7.05 ~9.12) μm,平均(8.24±0.48) μm,精孢子球形,直径(3.34±0.31) μm,病原菌在发病植株及PDA培养基上均易产生黑色菌核,基于形态特征鉴定病原菌为一种葡萄孢属Botrytis真菌.基于病原菌RPB2,HSP60,G3PDH基因及其联合基因构建的系统发育树,支持该病原菌为葡萄孢属真菌一个新种,该菌最适培养温度为20℃,最适pH为8,持续光照会抑制病原菌生长.
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