桔梗不同花色实时定量PCR内参基因的筛选及验证

马璐琳; 段青; 王祥宁; 杜文文; 贾文杰; 李想; 崔光芬; 王继华; 《分子植物育种 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：为了筛选适用于桔梗类黄酮/花青素苷合成途径基因表达情况RT-qPCR分析的内参基因,本研究根据已完成的桔梗蓝、紫、白3种花色花器官的转录组测序结果,选取了水通道蛋白基因(aquaporin,4QP)、微管蛋白基因(α-tubulin,α-TUB)、肌动蛋白基因(β-actin,β-A CT)、磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、亲环蛋白基因(cyclophilin,CYP)、转录延伸因子基因(elongation factor 1-α,EF-1α)、组蛋白基因(histone,HIS)、60S 核糖体蛋白基因(60S ribosomal protein L13-1,RPL13)和多聚泛素酶基因(polyubiquitin,UBQ)等9个常用看家基因作为候选内参基因,利用RT-qPCR对候选内参基因在桔梗不同组织器官中的表达情况进行检测分析,通过NormFinder、geNorm和BestKeeper 3个不同软件比较评价它们的表达稳定性.最终从9个候选内参基因中筛选出表达最稳定的RPL13,以RPL13作为内参基因,对桔梗类黄酮/花青素苷合成途径部分基因进行RT-qPCR分析,结果与转录组测序结果相吻合.因此RPL13是桔梗类黄酮/花青素苷合成途径基因表达分析的最适内参基因.本研究为桔梗花色素合成途径基因表达分析提供了合适的内参基因.

关键词： 桔梗 内参基因 RT-qPCR 基因表达 类黄酮/花青素苷合成途径