科研产出
家蚕热激蛋白Hsp 25.4对BmNPV增殖的影响
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究家蚕热激蛋白(Hsp25.4)基因在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrovirus,BmNPV)侵染家蚕后的表达变化规律,明确敲低该基因的表达后对BmNPV增殖复制的影响,为深入解析BmHsp25.4蛋白在BmNPV侵染家蚕过程中发挥的作用提供参考依据.[方法]以5龄家蚕幼虫为研究对象,经口添食10 μL预先制备好的BmNPV-T3株病毒悬液(5×108 个/mL),采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4基因在BmNPV侵染6 h各组织的表达情况,并选择相对表达量较高的3个组织,分析BmHsp25.4基因时空表达图谱;注射双链RNA(dsRNA)检测BmHsp25.4基因在体内的干涉效果,采用实时荧光定量PCR检测BmHsp25.4基因干涉后对BmNPV增殖复制的影响.[结果]BmNPV侵染家蚕6 h,BmHsp25.4基因在家蚕血液、中肠和脂肪体组织中的相对表达量升高;时空表达谱结果显示,BmHsp25.4基因在3个组织中的表达谱均呈先升高后降低的变化趋势,其中血液和中肠组织的相对表达量均在6 h达到峰值,而脂肪体则在BmNPV侵染12 h时相对表达量达到最高;注射dsRNA干涉后,试验组BmHsp25.4基因的相对表达量与对照组相比极显著(P<0.01,下同)降低61.81%,说明BmHsp25.4基因的相对表达量被成功干涉;BmHsp25.4基因干涉后,感染24 h试验组BmNPV在各时期增殖速度极显著高于对照组,感染48 h二者差异为显著水平(P<0.05).[结论]BmNPV侵染能够引起BmHsp25.4基因的表达,并且敲低BmHsp25.4基因的表达能影响BmNPV早期在虫体内的增殖,推测Hsp25.4蛋白在家蚕的抗病毒免疫中发挥关联功能.
关键词： 家蚕 家蚕核型多角体病毒(BmNPV) 热激蛋白 RNA干扰
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西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究
《福建农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】西花蓟马Frankliniella occidentalis (Pergande)是一种重要的外来入侵害虫,其繁殖能力强、寄主范围广、抗药性强,给我国蔬菜、花卉等经济作物造成了严重危害。本研究旨在评估膜饲喂和显微注射dsActin对西花蓟马Actin基因的沉默效率,以期为蓟马类等小型昆虫基因功能的研究提供方法和依据。【方法】通过膜饲喂和显微注射的方法将体外合成的dsActin导入西花蓟马二龄若虫体内,用RT-qPCR方法检测Actin基因的mRNA表达;通过单头饲养方法观察统计西花蓟马成虫体长、成虫翅膀或胸腹部畸形率及死亡率。【结果】dsActin膜饲喂后24、48、72 h,Actin基因的相对表达量分别为对照组的97%、91%和98%;通过显微注射将dsActin注入西花蓟马体腔,在注射后24、48、72 h,Actin基因的表达量分别为对照组的68%、56%和53%。注射dsActin的西花蓟马在第24～120 h死亡率为44%～98%,显著高于ds GFP对照组;此外,dsActin组个体体长仅为ds GFP对照组的90%,且翅膀或胸腹部出现畸形率为41%。【结论】显微注射dsActin能显著沉默西花蓟马Actin基因mRNA水平的表达,并引起西花蓟马个体不正常发育和死亡,从而建立蓟马类小型昆虫RNAi体系。
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真核生物转录调控的研究进展
《云南农业大学学报 》 2007 CSCD
摘要：真核生物基因表达的调控是目前分子生物学研究中重要的前沿领域,形成了多个热点。真核基因表达调控是一个十分复杂而协调有序的调控过程,这一过程不仅与基因本身的功能,也与细胞及机体的功能表现密切相关。而转录水平的调控是基因表达过程中最重要的第一步,由于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA之间的相互作用,以及一些复杂大分子复合物的形成导致真核生物的转录水平的调控是一个多级的复杂过程。近年来,随着新技术和新方法的出现,发现了许多与基因转录调控有关的DNA顺式作用元件、核蛋白因子及各种因子在核内形成的多种复合物,它们的相互作用使转录调节的效率得到了提高,也使人们更进一步认识了某些生命现象以及细胞行为和疾病的发生机理。本文从顺式作用元件、反式作用因子、转录复合物、激素的调节、协调作用及最新研究siRNA调控6个方面进行了阐述,同时也对目前转录调控存在的问题和前景做了分析。
关键词： 转录调控 顺式作用元件 反式作用因子 协同作用 siRNA
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甘蓝型油菜Fad2基因的RNA干扰及无筛选标记高油酸含量转基因油菜新种质的获得
《植物生理与分子生物学学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：利用已获得的油菜种子贮存蛋白——十字花科蛋白(cruciferin)基因的启动子和终止子,构建了无选择标记基因且同时具有正义及反义结构的油酰去饱和酶基因(Fad2)种子特异表达RNAi载体,并通过农杆菌介导的转化,获得了只含有油菜原有基因且Fad2基因表达受抑制的转基因植株。RT-PCR分析结果表明,在油酸含量达到83.9%的转基因植株中未检测到在非转基因植株中普遍存在的Fad2基因转录mRNA——一种典型的RNA干扰现象。通过对植株生长发育状态的观察比较,该高油酸含量转基因株系并未表现出双突变体中由于Fad2基因的失活所引起的植株抗寒能力差、发育迟缓、花蕾死亡、结实率低等不利农艺学性状。
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