文献类型： 中文期刊

作者： 郑宽瑜 ¹ ; 尚卫娜 ² ; 张洁 ² ; 郑雪 ² ; 董家红 ³ ;

作者机构： 1.云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创新重点实验室;浙江大学生命科学研究院

2.;云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创新重点实验室;浙江大学生命科学研究院

3.;云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创新重点实验室;浙江大学生命科学研究院;

关键词： 番茄环纹斑点病毒;Gn蛋白;原核表达;抗血清

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2017 年 09 期

页码： 179-183

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。