农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系的建立

周彬; 曹桦; 陆琳; 张钰莹; 李涵; 李东徽; 《云南农业大学学报 》 2025 CSCD

摘要：[目的]探究农杆菌介导的建兰遗传转化体系.[方法]以建兰品种市长红(Cymbidium ensifolium'Shizhanghong')单龙根扩繁得到的根状茎作为试验材料,筛选影响其遗传转化的农杆菌菌株、乙酰丁香酮浓度和抗生素质量浓度,研究影响农杆菌介导建兰遗传转化效率和再生效率的主要因素.[结果]市长红遗传转化的最佳菌株为EHA105,乙酰丁香酮最适浓度为 200 μmol/L,潮霉素最佳质量浓度为 40 mg/L.为保证高转化率和高再生率,市长红的最佳侵染体系为:预培养 10d后,在OD600 值为 0.4~0.6的农杆菌侵染液中振荡 20 min,最后在黑暗条件下共培养 3d.通过筛选的最佳遗传转化条件,经绿色荧光蛋白鉴定、抗生素筛选、PCR和qRT-PCR检测,最终在 180个市长红的根状茎中得到 17株转基因阳性植株,转化率为 9.44%.[结论]本研究建立了农杆菌介导的建兰品种市长红遗传转化体系,为其转基因育种奠定了基础.

关键词： 建兰品种市长红 根状茎 农杆菌侵染 遗传转化 绿色荧光蛋白(GFP)