科研产出
烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用
《农业生物技术学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白。用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清。DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测。本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。
关键词： 烟草丛顶病毒(TBTV) ORF3和ORF4 原核表达 抗血清制备
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昆明麝香石竹斑驳病毒分离物的鉴定与提纯及高效价抗血清的制备
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：对引起云南鲜切花麝香石竹植株叶斑驳、花朵变小的病毒分离物应用酶联免疫吸附测定(ELISA)和电子显微镜技术(IEM)检测,直径大约28nm,经TAS-ELISA测定仅与CarMV标准抗体反应为阳性。鉴定为麝香石竹斑驳病毒(Carnation mottle vi-rus,CarMV)的分离株。对病株检测筛选后进行分离纯化,将提纯后的CarMV制备兔抗血清获得高效价的抗体,间接ELISA测定为1∶10240。
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