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烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 龙亚芹 1 ; 王万东 2 ; 左瑞娟 1 ; 李凡 1 ; 尹朝先 1 ; 陈海如 1 ;

作者机构： 1.云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室

2.云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所

关键词： 烟草丛顶病毒(TBTV);ORF3和ORF4;原核表达;抗血清制备

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2011 年 19 卷 02 期

页码： 356-362

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白。用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清。DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测。本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。

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