甘蔗宿根矮化病菌PCR检测体系的优化与应用

李文凤; 卢文洁; 黄应昆; 王明强; 王晓燕; 罗志明; 《云南农业大学学报(自然科学版) 》 2011 北大核心 CSCD

摘要：为建立能快速灵敏检测甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)的PCR检测方法。本文通过改进模板DNA的制备方法,在PCR基本程序的基础上,以甘蔗宿根矮化病菌(Leifsonia xyli subsp.xyli,Lxx)16S-23SrDNA基因间隔区特异性引物,调整PCR扩增反应体系各组分的浓度、反应的退火温度、循环参数等主要因子,优化PCR反应体系。此检测体系能从感染RSD的样品中扩增出大小为438 bp的特异性片段,而阴性对照和未感染样品则未扩增出任何片断;未优化仅从稀释30倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段,优化后可以从稀释3 000倍的蔗汁总DNA中扩增出RSD的特异性片段。对31份田间采集样品检测,未优化的阳性检出率为32.26%;优化后阳性检出率74.19%,与I-ELISA检测结果一致。应用此检测方法可稳定、快速地检测出蔗株是否感染RSD,且检测效率高,适合于田间大批量样品快速检测。

关键词： 甘蔗宿根矮化病菌 PCR检测 16S-23SrDNA 间接酶联免疫吸附法