科研产出
生菜质体表达载体构建及gfp基因原核表达分析
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以四季耐抽薹生菜为材料,PCR扩增并克隆了生菜质体rpo A基因的两侧翼的基因片段,利用该两基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了生菜质体定点转化载体p Brpo A-GFP,并进行了原核表达分析。结果表明,PCR所扩增的两条基因区段大小为1.2与1.1 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aad A-Tpsb A表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子Tpsb A的调控下高效表达,表达量约占总可溶性蛋白的45.6%,包涵体占菌体蛋白的47.5%,该载体的构建为后期生菜质体转化体系的建立和其它功能基因导入生菜质体进行性状改良奠定了基础。
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gfp基因甘蓝质体表达载体构建及原核表达分析
《西北植物学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高水平表达,表达量约占总可溶性蛋白的41.0%,包涵体占菌体蛋白的38.0%。该载体的构建为后期甘蓝质体转化体系的建立和其它功能基因导入甘蓝质体进行性状改良奠定了基础。
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