科研产出
利用酵母双杂交技术筛选鉴定与番茄环纹斑点病毒NSs蛋白互作的西花蓟马蛋白
《昆虫学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]筛选鉴定西花蓟马Franiklinella ocicdentalis体内与番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus, TZSV)NSs蛋白互作的介体因子.[方法]利用酵母双杂交技术筛选与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白;进行序列分析鉴定后,将捕获的蛋白与NSs基因回转到酵母细胞,利用营养缺陷型培养基鉴定蛋白互作情况.再利用GST Pull-down技术验证TZSV NSs与鉴定出的西花蓟马蛋白的体外互作关系.[结果]构建了TZSV NSs的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-NSs,确定了诱饵质粒对酵母AH109细胞无毒性,并且无自激活活性.序列分析发现与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白为类电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion-selective channel-like, VDAC).酵母回转实验显示TZSV NSs与西花蓟马VDAC在酵母细胞内存在特异性互作.GST Pull-down结果表明TZSV NSs与西花蓟马VDAC在体外存在相互作用.[结论]通过酵母双杂交和GST Pull-down技术,分别在酵母细胞内和体外证实了TZSV NSs和西花蓟马VDAC存在特异性互作.这些结果有助于揭示西花蓟马VDAC蛋白调控西花蓟马持久传毒的机制,为虫传病毒病的防治提供理论基础.
关键词： 西花蓟马 酵母双杂交 番茄环纹斑点病毒 NSs蛋白 VDAC
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吡虫啉对南方小花蝽捕食西花蓟马功能反应的影响
《云南农业大学学报(自然科学) 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确吡虫啉对南方小花蝽捕食功能反应和寻找效应的影响。【方法】选取0.8、1.6和2.4 mg/L的吡虫啉,以蒸馏水为对照,对南方小花蝽进行处理;分别在西花蓟马密度为30、40和50头/瓶下探究不同吡虫啉质量浓度对南方小花蝽捕食西花蓟马功能的影响。【结果】在3个不同质量浓度吡虫啉下,南方小花蝽对西花蓟马的功能反应均符合HollingⅡ型圆盘方程。南方小花蝽捕食量的差异与吡虫啉质量浓度有一定的关系,突出表现在猎物密度为50头的处理中,吡虫啉质量浓度为2.4 mg/L时南方小花蝽的捕食量显著低于对照(P<0.05)。南方小花蝽对西花蓟马的控制作用和寻找效应在吡虫啉处理下有所下降,吡虫啉质量浓度为0.8 mg/L时影响不显著(P>0.05),吡虫啉质量浓度为1.6和2.4 mg/L时,南方小花蝽对西花蓟马的控制作用和寻找效应均显著降低(P<0.05)。【结论】吡虫啉对南方小花蝽捕食西花蓟马的数量和功能反应均有影响,在较低质量浓度范围内,随着吡虫啉质量浓度增加,南方小花蝽对西花蓟马的的捕食数量和控制作用降低。
关键词： 南方小花蝽 西花蓟马 捕食作用 功能反应 寻找效应 吡虫啉
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西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究
《福建农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】西花蓟马Frankliniella occidentalis (Pergande)是一种重要的外来入侵害虫,其繁殖能力强、寄主范围广、抗药性强,给我国蔬菜、花卉等经济作物造成了严重危害。本研究旨在评估膜饲喂和显微注射dsActin对西花蓟马Actin基因的沉默效率,以期为蓟马类等小型昆虫基因功能的研究提供方法和依据。【方法】通过膜饲喂和显微注射的方法将体外合成的dsActin导入西花蓟马二龄若虫体内,用RT-qPCR方法检测Actin基因的mRNA表达;通过单头饲养方法观察统计西花蓟马成虫体长、成虫翅膀或胸腹部畸形率及死亡率。【结果】dsActin膜饲喂后24、48、72 h,Actin基因的相对表达量分别为对照组的97%、91%和98%;通过显微注射将dsActin注入西花蓟马体腔,在注射后24、48、72 h,Actin基因的表达量分别为对照组的68%、56%和53%。注射dsActin的西花蓟马在第24～120 h死亡率为44%～98%,显著高于ds GFP对照组;此外,dsActin组个体体长仅为ds GFP对照组的90%,且翅膀或胸腹部出现畸形率为41%。【结论】显微注射dsActin能显著沉默西花蓟马Actin基因mRNA水平的表达,并引起西花蓟马个体不正常发育和死亡,从而建立蓟马类小型昆虫RNAi体系。
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西花蓟马几丁质合成酶UAP基因克隆及功能分析
《福建农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】阐明几丁质合成通路中的关键基因UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UDP N-acetylglucosamine pyrophosphorylases, UAP)对西花蓟马Frankliniella occidentalis生长发育的影响。【方法】基于西花蓟马转录组数据,克隆验证了UAP基因的开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)全长序列,命名为FoccUAP。利用RT-qPCR方法分析FoccUAP在各个组织和不同龄期的表达情况。最后通过向西花蓟马蜕皮24 h的2龄若虫显微注射ds UAP,检测沉默效率,观察其对西花蓟马生长发育的影响。【结果】FoccUAP基因开放阅读框全长1 545 bp,编码514个氨基酸,预测蛋白分子量为56.738 kDa,具有Glyco-tranf-GTA-type Super family家族的保守结构域,与等翅目、蜚蠊目、直翅目和半翅目昆虫的UAP基因亲缘关系较近。FoccUAP基因在西花蓟马各个组织都有表达,在头部和腹部相对表达量最高,触角、胸部和足相对表达量较低。该基因在虫体生长发育的各个阶段均有表达,其中2龄幼虫、蛹以及羽化后24、48、168、240 h的成虫表达量分别是1龄幼虫的1.30、2.50、1.56、2.0、2.43和2.56倍。RNAi结果表明,注射ds UAP的西花蓟马羽化率(36.3%)和注射后120 h的存活率(5.0%)均显著低于ds GFP对照组,且注射ds UAP的西花蓟马成虫出现翅膀发育不完整、胸腹部皱缩不规则等畸形现象。【结论】FoccUAP基因对西花蓟马生长发育具有重要的作用。
关键词： 西花蓟马 UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶 几丁质合成 RNAi
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单头西花蓟马总RNA提取方法的比较研究
《山东农业科学 》 2017
摘要：Tri Pure法和RNA提取试剂盒法是目前实验室动植物RNA提取的常用方法。本试验通过对两种不同的RNA提取试剂盒与Tri Pure法进行比较,发现Trans公司研发的型号为ER501-01的Trans Zol Up Plus RNA Kit试剂盒适合提取单头西花蓟马总RNA,所得到的RNA纯度和浓度都比较高。该研究结果为通过分子手段研究蓟马等小型昆虫提供理论基础。
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西花蓟马人工繁殖技术
《黑龙江农业科学 》 2017
摘要：为了获得大量虫龄整齐、发育一致的西花蓟马若虫及成虫,开展了西花蓟马室内人工繁殖技术的研究。通过形态学方法鉴定出西花蓟马成虫,将成虫转接至香石竹植株产卵48h,以产卵后的香石竹茎段为材料,接入培养基,获取清洁虫源。结果表明:常规组培方法生产出的香石竹组培苗作为寄主,将获得的清洁虫源接种到寄主上,在室内已连续饲养3代,平均存活率均超过80%,完成1代大约需要14d。此方法可用于室内进行西花蓟马种群的建立和繁殖,为综合防治技术的研究提供大量虫源。
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基于mtDNA-COⅠ的云南西花蓟马的遗传分析
《植物保护 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：西花蓟马是我国重要的入侵害虫之一,为了解其不同地理种群的遗传分化,测定了云南6个地理种群141个个体的mtDNA-COⅠ基因片段。结果表明:在比对的433bp基因片段中,变异位点19个,共检测出5个共享单倍型,单倍型间出现了明显的遗传分化,证实了云南西花蓟马为一个复合种群。地理种群间的遗传距离较低,遗传距离与地理距离无显著相关性。各地理种群西花蓟马的遗传分化指数Fst为-0.021 19,种群间变异多为负值,表明云南西花蓟马种群遗传变异主要来自于种群内部,种群间未发生明显的遗传分化。
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西花蓟马在月季不同种植模式下的种群发生特点
《应用昆虫学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：西花蓟马Frankliniella occidentalis(Pergande)是昆明花卉种植区主要害虫之一,本文对西花蓟马在不同月季品种和不同种植模式下的种群发生特点进行了3年的调查。结果表明,西花蓟马在昆明全年发生,5—7月份是全年的发生高峰期。大棚栽培方式下,发生高峰期的虫量平均为8.7头/朵花;露地模式下西花蓟马的发生高峰期较大棚模式提前20~30 d,发生高峰期的虫口密度为9.0头/朵花。t-测验结果表明,两种种植模式间在0.05水平显著差异(P<0.05)。西花蓟马在不同品种上的种群消长动态基本一致,艳粉上的峰值密度平均为6.1头/朵花,超级品种上为7.5头/朵花,差异不显著。
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