科研产出
水稻酵母双杂交文库构建及PID2胞内结构域互作蛋白的筛选
《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了进一步挖掘水稻PID2胞内互作蛋白质，阐明Pid2介导的稻瘟病抗性机制。本研究利用SMART技术，构建了受稻瘟病诱导后不同时间段的含抗性基因Pid2水稻材料的cDNA文库；通过PCR扩增获得PID2胞内结构域编码片段Pid2-JM，构建了诱饵表达载体pGBK-Pid2-JM，并进一步利用酵母双杂交技术筛选Pid2-JM的互作蛋白。结果表明，构建的cDNA酵母文库细胞密度为9.0×10~7Cells/mL，文库插入片段在500～2 000 bp之间，重组率为100%，诱饵载体无自激活活性；利用诱饵载体经筛选文库后，新发现一个能与Pid2-JM互作的U-box类E3泛素连接酶PBP1，经回转试验验证了PBP1与Pid2-JM可在烟草细胞内互作。综上，本研究成功构建了稻瘟病诱导下的水稻酵母双杂交文库，并筛选到一个能与PID2胞内结构域互作的U-box类E3泛素连接酶，该结果为进一步揭示水稻抗稻瘟病信号转导机制提供参考。
关键词： 稻瘟病 酵母双杂交 Pid2 互作蛋白 E3泛素化连接酶
全文链接
请求原文
利用酵母双杂交技术筛选鉴定与番茄环纹斑点病毒NSs蛋白互作的西花蓟马蛋白
《昆虫学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：[目的]筛选鉴定西花蓟马Franiklinella ocicdentalis体内与番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot virus, TZSV)NSs蛋白互作的介体因子.[方法]利用酵母双杂交技术筛选与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白;进行序列分析鉴定后,将捕获的蛋白与NSs基因回转到酵母细胞,利用营养缺陷型培养基鉴定蛋白互作情况.再利用GST Pull-down技术验证TZSV NSs与鉴定出的西花蓟马蛋白的体外互作关系.[结果]构建了TZSV NSs的酵母双杂交诱饵质粒pGBKT7-NSs,确定了诱饵质粒对酵母AH109细胞无毒性,并且无自激活活性.序列分析发现与TZSV NSs互作的西花蓟马蛋白为类电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion-selective channel-like, VDAC).酵母回转实验显示TZSV NSs与西花蓟马VDAC在酵母细胞内存在特异性互作.GST Pull-down结果表明TZSV NSs与西花蓟马VDAC在体外存在相互作用.[结论]通过酵母双杂交和GST Pull-down技术,分别在酵母细胞内和体外证实了TZSV NSs和西花蓟马VDAC存在特异性互作.这些结果有助于揭示西花蓟马VDAC蛋白调控西花蓟马持久传毒的机制,为虫传病毒病的防治提供理论基础.
关键词： 西花蓟马 酵母双杂交 番茄环纹斑点病毒 NSs蛋白 VDAC
全文链接
请求原文
首页上一页1下一页尾页
