番茄斑萎病毒运动蛋白NSm的原核表达及抗体制备

尚卫娜; 郑宽瑜; 董家红; 张仲凯; 洪健; 周雪平; 《植物病理学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,利用大肠杆菌系统表达NSm蛋白,以Ni~(2+)-NTA agarose亲和柱纯化该蛋白与His组氨酸的融合蛋白,免疫家兔制备融合蛋白多克隆抗体。Western blot检测显示,该抗体与NSm重组蛋白以及普通烟病叶中的NSm蛋白具有特异性反应。采用该抗体对TSWV感染的普通烟叶片低温超薄切片进行免疫胶体金标记,透射电镜观察发现特异性金颗粒主要定位在病叶细胞的胞间连丝中,而健康烟草叶片组织中没有金颗粒特异性标记。结果表明,该抗体可用于研究NSm在细胞中的定位。

关键词： 番茄斑萎病毒 NSm蛋白 多克隆抗体 免疫胶体金标记