科研产出
高效抗虫基因PinⅡ转化水稻的研究
《西南农业学报 》 2003 CSCD
摘要：利用农杆菌介导的转化方法对1个籼稻品种和3个粳稻品种进行了转化。所用质粒为pCAMBI1300,其上带有马铃薯蛋白酶抑制剂基因PinⅡ和高效启动子ACTⅠ以及调节子Intron。通过添加有利于转化的物质乙酰丁香酮及影响转化的各因素(农杆菌的培养方法、共培养天数、愈伤组织诱导方法及继代次数)进行综合优化后,建立了农杆菌介导的水稻高效转化体系。将成熟胚用pCAMBI1300/LBA4404浸染后,筛选出抗性愈伤组织并获得转化植株。其中抗性愈伤组织产生率最高达51 8%(粳稻)和31 5%(籼稻),转化植株再生率最高达67 6%(粳稻)和47 5%(籼稻)。初筛苗中PCR阳性苗得率最高达33 3%(粳稻)和27 4%(籼稻)。PCR结果初步表明PinⅡ基因已整合到水稻基因组中。田间抗虫试验初步表明,阳性苗虫害率低于其受体亲本虫害率。本研究还在转基因水稻中发现了性状明显变异的植株,是进行水稻遗传背景分析和优良性状利用的宝贵材料。
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几丁质酶―葡聚糖酶双介基因导入滇型杂交稻恢复系提高稻瘟病抗性的研究
《遗传学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：将含有菜豆(Phaseolus limensis)几丁质酶基因和烟草(Nicotiana tabacum)β-1,3-葡聚糖酶基因的pBLGC(16.5kb)质粒用基因枪法导入滇型杂交稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)恢复系"南29"中,总计获得93个转化再生植株,以β-1,3-葡聚糖酶基因制备探讨对T1代株系进行Southern杂交分析,17个株系为杂交阳性,证实外源基因完整结构已整合到水稻基因组中;连续多代的PCR追踪检测证实外源基因已遗传至T4代;对所获得的6个PCR检测阳性T4代品系进行了稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)生理小种接种鉴定和稻瘟病大田诱发鉴定,结果表明,转基因品系对稻瘟病的抗性较受体对照大幅度提高,获得了稻瘟病新抗源,但不同品系稻瘟病抗性并不相同.
关键词： 几丁质酶基因 葡聚糖酶基因 遗传转化 杂交稻 稻瘟病
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几丁质酶-葡聚糖酶双价基因导入滇型杂交稻恢复系提高稻瘟病抗性的研究
《遗传学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD
摘要：将含有菜豆 (Phaseoluslimensis)几丁质酶基因和烟草 (Nicotianatabacum) β 1,3 葡聚糖酶基因的pBLGC(16 5kb)质粒用基因枪法导入滇型杂交稻 (OryzasativaL .ssp .japonica)恢复系“南 2 9”中 ,总计获得 93个转化再生植株 ,以β 1,3 葡聚糖酶基因制备探针对T1 代株系进行Southern杂交分析 ,17个株系为杂交阳性 ,证实外源基因完整结构已整合到水稻基因组中 ;连续多代的PCR追踪检测证实外源基因已遗传至T4 代 ;对所获得的 6个PCR检测阳性T4代品系进行了稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)生理小种接种鉴定和稻瘟病大田诱发鉴定 ,结果表明 ,转基因品系对稻瘟病的抗性较受体对照大幅度提高 ,获得了稻瘟病新抗源 ,但不同品系稻瘟病抗性并不相同。
关键词： 几丁质酶基因 葡聚糖酶基因 遗传转化 杂交稻 稻瘟病
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转几丁质酶-葡聚糖酶基因水稻稻瘟病抗谱分析
《中国水稻科学 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：用来源于云南各地属于 2 4个稻瘟病菌 (Magnaporthegrisea)生理小种的 3 3个菌株 ,对受体品种南 2 9及其 4个转几丁质酶 β 1,3 葡聚糖酶串联基因水稻T5 代品系进行了温室接种鉴定。结果表明 ,不能侵染受体品种南 2 9的 13个菌株也不能侵染转基因品系 ,可侵染受体品种南 2 9的 2 0个菌株一般不能侵染转基因品系 ,转基因水稻对稻瘟病菌抗性范围较受体对照扩大 ,证明转几丁质酶 葡聚糖酶基因水稻对稻瘟病具有一定的广谱抗性 ;诱发条件下 ,转基因品系大田叶瘟病情指数为 0～ 1级 ,穗瘟发病率为 0 .3 %～ 10 .2 3 % ,抗性较受体对照大幅度提高 ,表明这些品系在稻瘟病抗病育种中是有应用潜力的。
关键词： 水稻 转基因 几丁质酶基因 葡聚糖酶基因 稻瘟病 抗谱
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GNA和α-PAP双抗表达载体的构建及对烟草的遗传转化
《西南农业学报 》 2002 CSCD
摘要：将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,烟草基因组中含有这两个抗性基因。
关键词： 雪花莲凝集素(GNA) 商陆抗病毒蛋白(α-PAP) 表达载体构建 遗传转化
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马铃薯prp1-1启动子的克隆及转基因研究
《西南农业学报 》 2002 CSCD
摘要：采用PCR技术 ,从云南马铃薯叶片DNA中分离克隆到了马铃薯病程相关蛋白 (prpl - 1)基因启动子 ,与国外文献报道序列完全一致。将这一启动子亚克隆到中间载体pUC18中 ,再构建到植物表达载体 pBI12 1上 ,以取代其原有的CaMV35S启动子 ,得到重组植物表达载体 pBI12 1M ;用电脉冲法将pBI12 1M转入农杆菌LBA4 40 4。应用农杆菌介导法 ,将携带有 pBI12 1M重组质粒的农杆菌转化烟草 ,经卡那霉素筛选 ,得到了一批转基因植株。转基因植株的PCR鉴定表明 ,启动子整合到了烟草植株基因组中。本研究为下一步通过X -Glu染色法检测启动子下GUS基因的表达情况 ,研究该启动子的病原菌特异性诱导活性 ,并建立新的植物转基因系统奠定了基础
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