科研产出
云南景洪直立型普通野生稻抗稻瘟病Pi-ta~+等位基因的克隆与分析
《遗传 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：用PCR法从景洪直立紫杆普通野生稻中克隆了抗稻瘟病基因Pi-ta+的4672bp序列,该序列包含完整的编码框、内含子和终止密码子下游的331bp。所克隆的直立型紫杆普通野生稻Pi-ta基因序列的编码区与已报道的日本栽培稻社糯(Yashiro-mochi)和元江普通野生稻相应序列间的同源性分别为99.86%和98.78%。与社糯的Pi-ta基因相比,其编码区有4个核苷酸的差异并导致3个氨基酸残基的改变,而内含子区域有6个核苷酸差异。对该序列进一步分析发现,其推导的氨基酸残基的918位为丙氨酸,属于稀有的抗稻瘟病的Pi-ta+等位基因。景洪直立型普通野生稻Pi-ta+基因因其编码序列和推导的氨基酸序列与社糯有所不同,推测其抗病能力大小和抗菌谱可能与社糯的Pi-ta基因不同。直立型普通野生稻中Pi-ta+等位基因的克隆为进一步利用该基因改良栽培稻抗病能力提供了前期物质基础。
关键词： 景洪直立型普通野生稻 Pi-ta+等位基因 基因克隆 DNA多态性
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cDNA文库构建策略及其分析研究进展
《云南农业大学学报 》 2006 CSCD
摘要：cDNA文库构建和筛选是基因克隆的重要方法之一,它是目前发现新基因和研究基因功能的基本工具。从cDNA文库中可以筛选到目的基因,并直接用于该基因的表达。经典cDNA文库存在克隆的片段短等缺点,而全长cDNA文库则能提供完整的mRNA信息,从而克隆cDNA全长;对文库进行均一化处理即均一化cDNA文库,可以增加克隆低丰度mRNA的机会;差减cDNA文库在研究生物体某一时期基因差异表达上具有重要的意义;改进的固相cDNA很大程度上提高了建库的效率和质量。本文以阐述基本原理为主,介绍几种近年来常用的cDNA构建的方法及其优缺点。
关键词： cDNA文库 cDNA全长 基因克隆 均一化cDNA文库 差减cDNA文库 固相cDNA文库 快速扩增cDNA末端(RACE)
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马铃薯prp1-1启动子的克隆及转基因研究
《西南农业学报 》 2002 CSCD
摘要：采用PCR技术 ,从云南马铃薯叶片DNA中分离克隆到了马铃薯病程相关蛋白 (prpl - 1)基因启动子 ,与国外文献报道序列完全一致。将这一启动子亚克隆到中间载体pUC18中 ,再构建到植物表达载体 pBI12 1上 ,以取代其原有的CaMV35S启动子 ,得到重组植物表达载体 pBI12 1M ;用电脉冲法将pBI12 1M转入农杆菌LBA4 40 4。应用农杆菌介导法 ,将携带有 pBI12 1M重组质粒的农杆菌转化烟草 ,经卡那霉素筛选 ,得到了一批转基因植株。转基因植株的PCR鉴定表明 ,启动子整合到了烟草植株基因组中。本研究为下一步通过X -Glu染色法检测启动子下GUS基因的表达情况 ,研究该启动子的病原菌特异性诱导活性 ,并建立新的植物转基因系统奠定了基础
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不同花色矮牵牛细胞色素b5蛋白的cDNA克隆及序列分析
《云南植物研究 》 2002 北大核心 CSCD
摘要：以云南不同花色矮牵牛的花瓣为材料 ,提取总RNA ,用Oligo (dT)作为引物反转录合成cDNA第一链。以此为模板 ,用根据国外报道的矮牵牛细胞色素b5蛋白的cDNA序列设计合成的引物进行PCR扩 ,均扩增到一条约 4 5 0bp的片段 ,分别克隆到pGEM -T载体上。对重组克隆进行序列分析 ,结果表明所克隆到的矮牵牛细胞色素b5蛋白的cDNA的编码区均含有 4 4 7个核苷酸 ,编码 149个氨基酸残基 ,与国外报道的一致 ;但其核苷酸及氨基酸的序列与国外报道的有所不同 ,即与国外的相比 ,紫红色、蓝紫色矮牵牛中的该cDNA的核苷酸有 1个不同 ,而氨基酸完全相同 ;粉红色、白色矮牵牛中的有 3个核苷酸不同 ,并导致了2个氨基酸的不同。暗示该基因对花色的调控可能与其编码cDNA的一级结构有关。
关键词： 花色 矮牵牛 细胞色素b5蛋白(Cytb5) 基因克隆
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苦参凝集素蛋白基因的分离克隆(英文)
《植物学报 》 2001 SCI 北大核心 CSCD
摘要：自苦参 (SophoraflavescensAit.)块根中分离得到一种 32kD的凝集素蛋白 (SFL) ,其对兔血及人的 4种血型都具有很强的凝集活性 ,对棉花枯萎病菌 (FusariumvasinfectumAtk .)、小麦赤霉病菌 (Gibberellasaubinetii (Mont.)Sacc .)和水稻稻瘟病菌 (PiriculariaoryzaeCav .)的生长有明显抑制作用。依此凝集素蛋白N端部分氨基酸序列合成引物 ,通过 5′、3′_RACE技术 ,从苦参块根总RNA中克隆到了编码这一凝集素蛋白的全长cDNA序列 (已注册GenBank ,AF2 851 2 1 )。根据全长cDNA序列推导这一cDNA序列编码一个 2 84个氨基酸的前体蛋白 ,而分离得到的凝集素蛋白为一个 2 54个氨基酸残基的成熟蛋白 ,在其第 1 82位点含一个N糖基化位点N_L_S。
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