科研产出
阳离子脂质体转染家蚕培养细胞的技术体系研究
《蚕业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：阳离子脂质体转染家蚕培养细胞是家蚕基因功能研究的重要技术之一。利用阳离子脂质体Lipofectamine2000与pBac[A3Neo+A3EGFP]转基因表达载体,对家蚕卵巢细胞BmN-SWU1、BmN-SWU2、BmN和草地贪夜蛾卵巢细胞Sf21进行了外源DNA质量、脂质体用量、转染细胞密度和转染孵育时间等4个转染条件的优化实验,筛选到了阳离子脂质体转染效率最高的细胞系BmN-SWU1。BmN-SWU1细胞的最佳转染条件为:外源DNA0.6μg,脂质体2.5μL,细胞密度1×105mL-1,无血清条件下孵育24 h。此条件下转染效率可达55.08%。用抗生素G418筛选转染后的BmN-SWU1细胞,建立了GFP转基因细胞系。
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浅谈分子标记在水稻育种上的应用
《农村经济与科技 》 2008
摘要：分子标记技术的应用日趋广泛,对水稻育种研究有重要的价值。本文对分子标记在水稻育种中的应用研究进展进行了综述,探讨了分子标记的应用在水稻育种上的优势。
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本山茶与勐库茶疑似杂交后代的RAPD鉴定
《北方园艺 》 2008 北大核心
摘要：应用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术,对云南临沧白莺山的8个茶树植株进行了亲缘关系鉴定。筛选出的19个RAPD引物在疑似双亲本山茶和勐库茶中,分别能扩增出28和20条各自的特异条带。通过特异条带在疑似杂交后代的表现数量、表现率及聚类树状图两方面的分析,可能的推测是:黑条子茶、二嘎子茶可能是本山茶在长时间的历史过程中发生较大变异的产物;白芽子茶、黑条子茶和二嘎子茶可能是本山茶与勐库茶自然杂交获得的F1代后又经混交,经数代繁衍后形成的产物。
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AGPase反义基因转化番茄研究
《云南农业大学学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：将含有魔芋AGPase反义基因的质粒pBAGP通过冻融法转化到根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株LBA4404中,再采用叶盘法将其转化进番茄(Lycopersicon esculentumMill.)栽培品种"合作908"中,获得含AGPase基因的番茄抗性植株。最后,经卡那抗性鉴定、NPTⅡ基因和AGPase基因PCR扩增和PCR-Southern杂交检测表明,反义AGPase基因成功整合到番茄基因组,为番茄改良品质育种奠定了材料基础。
关键词： 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 反义载体 遗传转化 番茄
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抗虫基因CryIA(b)植物表达载体的构建
《西部林业科学 》 2008
摘要：苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因具有对鳞翅目昆虫的毒杀作用,因此被广泛用于转基因研究,以提高植物的抗虫能力。故以含有CryIA(b)基因的PKUB质粒为模板,利用PCR技术克隆出抗虫基因〔CryIA(b)〕,将其构建到PGEMT-Easy上,获得重组质粒PGEMT-CryIA(b),并测定全部序列,将PGEMT-CryIA(b)用BamH I和Sm aI酶切后插入表达载体PB I121的CaMV35S启动子和NOS终止子之间,构建成准备用于丽江云杉等针叶树种遗传转化CryIA(b)基因的植物表达载体PB I-CryIA(b),采用液氮冻融法将其转化到根癌农杆菌LBA4404和C58中,为下一步的转化工作奠定了基础。
关键词： 抗虫基因 CryIA(b)基因 植物表达载体
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gfp基因甘蓝质体表达载体构建及原核表达分析
《西北植物学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以甘蓝自交系‘03097’为试材,PCR扩增并克隆了甘蓝质体的trnI-trnA基因区段,利用该基因区段作为定点整合外源基因的同源重组片段,构建了甘蓝质体定点转化载体,并进行了原核表达分析。结果表明,所扩增的基因区段大小为2.7 kb。进行序列分析后,经酶切、连接和转化,构建成含Prrn-gfp-aadA-TpsbA表达盒的质体表达载体,酶切鉴定表明,所构建载体符合预期设计;gfp基因能够在质体特异性启动子Prrn及终止子TpsbA的调控下高水平表达,表达量约占总可溶性蛋白的41.0%,包涵体占菌体蛋白的38.0%。该载体的构建为后期甘蓝质体转化体系的建立和其它功能基因导入甘蓝质体进行性状改良奠定了基础。
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从云南蝴蝶兰上检测到番茄斑萎病毒属病毒
《植物病理学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：应用电镜观察、DAS-ELISA以及RT-PCR检测,从症状表现黄化、环斑的云南蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病样中分离得到的一个病毒分离物Tospo-Pha。该分离物粒子近球形、具包膜、直径约90nm,与番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mosaic virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)复合抗血清呈强阳性反应,分子检测发现该分离物SRNA5′末端序列与CaCV大岩桐分离物(CaCV-Gloxinia)同源性最高(91.0%),在系统进化树中与CaCV聚于同一分支。上述结果表明,从云南蝴蝶兰中分离到的Tospo-Pha属于Tospovirus病毒。
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