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滇龙胆1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR的克隆、序列分析与原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 张晓东 1 ; 赵静 1 ; 李彩霞 1 ; 李涛 1 ; 王元忠 2 ;

作者机构： 1.玉溪师范学院资源与环境学院

2.云南省农业科学院药用植物研究所

关键词： 滇龙胆;1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因;基因克隆;序列分析;原核表达

期刊名称： 中草药

ISSN： 0253-2670

年卷期： 2014 年 45 卷 16 期

页码： 2378-2384

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆萜类合成关键酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因GrDXR,进行序列分析和原核表达。方法根据滇龙胆转录组中GrDXR基因序列,设计引物,通过RT-PCR扩增得到GrDXR开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrDXR,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达。结果 GrDXR ORF全长1 425 bp,编码474个氨基酸。序列分析表明,GrDXR基因是DXR家族成员;蛋白质序列系统发育分析表明,GrDXR与萝芙木RvDXR、橡胶树HbDXR和长春花CrDXR亲缘关系较近。构建pGEX-4T-1-GrDXR重组质粒,获得稳定的原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrDXR基因,建立其稳定的原核表达体系,为进一步纯化GrDXR蛋白,研究其结构和功能奠定基础。

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