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柱花草AFLP反应体系的建立与引物筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 韩蓉蓉 1 ; 曾黎琼 2 ; 史亮涛 3 ; 刘国道 4 ; 何光熊 3 ; 文亦芾 1 ; 金杰 3 ;

作者机构： 1.云南农业大学动物科学技术学院

2.云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所/云南省农业生物技术重点实验室/农业部西南作物基因资源与种质创制重点实验室

3.云南省农业科学院热区生态农业研究所

4.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所

关键词： 柱花草;DNA;AFLP;引物筛选

期刊名称： 热带农业科学

ISSN： 1009-2196

年卷期： 2014 年 34 卷 04 期

页码： 46-52+69

摘要： 以柱花草奥克雷品种为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,对影响AFLP反应体系的主要因素进行了优化,建立了柱花草的AFLP反应体系。结果表明:20μL为最佳反应体系,酶切体系中DNA模板量为1000ng,用5 U EcoR I 37℃酶切2 h、5 U Mse I 65℃酶切2 h效果最佳;分别取5μL酶切液、1μL T4连接酶(5μL/L)、1μL EcoR I接头、1μL Mse I接头、2μL缓冲液(T4DNA酶自带),于22℃下连接10 min效果最佳;预扩增体系中模板稀释15倍、Mg2+浓度为0.75 mmol/L、Taq酶用量为1 U、dNTPs浓度为0.2 mmol/L、引物浓度为2 ng/μL效果最佳;选择扩增体系中模板稀释20倍、Mg2+浓度为1.25 mmol/L、Taq酶为1 U、dNTPs浓度为0.225 mmol/L、引物浓度为0.4 ng/μL效果最佳。利用热研5号、奥克雷2个品种对8对引物组合进行筛选,筛选出46对引物组合,为利用AFLP标记对柱花草进行分子生物学研究及分子育种奠定基础。

  • 相关文献

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