文献类型: 中文期刊
作者: 梁燕梅 1 ; 朱攀攀 2 ; 李军 2 ; 赵爱春 2 ; 刘长英 2 ; UMUHOZA Diane 2 ; 李镇刚 2 ; 鲁成 2 ; 余茂德 2 ;
作者机构: 1.西南大学生物技术学院
2.西南大学生物技术学院;贵阳中医学院;云南省农业科学院蚕桑蜂蜜研究所
关键词: 桑树;果实;类黄酮3–O–葡萄糖基转移酶;UFGT基因;表达;酶活性分析
期刊名称: 园艺学报
ISSN: 0513-353X
年卷期: 2015 年 10 期
页码: 1919-1930
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 根据同源比对,从川桑(Morus notabilis)基因组数据库(morus.swu.edu.cn/morusdb/)中鉴定类黄酮3–O–葡萄糖基转移酶基因(MaUFGT)家族成员。采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析MaUFGT在桑树各组织和发育期的表达水平。随着果实发育成熟,MaUFGT1、MaUFGT2和MaUFGT3的表达模式相似,均呈上升趋势;在从顶芽依次向下不同叶位中,3个UFGT基因表达呈现先降低后升高,再降低又升高的趋势;在幼茎皮层和托叶中大量表达,幼茎表皮和木质部、叶柄中表达量较低,有的甚至不表达。MaUFGT2的表达量在3个基因中都是最高的,推测其是该基因家族的主效基因。从桑树品种‘嘉陵40’成熟果实中克隆了UFGT2基因,命名为MaUFGT2,登录号KP455729.1。其c DNA全长为1 386 bp,编码461个氨基酸,推测蛋白质分子量约为51 k D。序列比对结果发现所编码蛋白在不同物种间保守性不高。将MaUFGT2克隆到p ET-28a(+)原核表达载体后在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为55 k D,主要以包涵体形式表达,在上清液中也有少量表达。MaUFGT2蛋白经纯化和复性后,最后通过高效液相色谱(HPLC)分析该蛋白的酶活性,结果表明,体外酶活性鉴定MaUFGT2能够催化UDP葡萄糖转移至槲皮素形成槲皮素3–β–D–葡萄糖苷,验证了其具有糖基转移酶的功能。
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