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云南红梨PyMT基因的克隆、原核表达和功能分析

文献类型： 中文期刊

作者： 樊磊 1 ; 张晓东 1 ; 陈丽梅 1 ; 苏俊 2 ; 舒群 2 ; 李昆志 1 ;

作者机构： 1.昆明理工大学生物工程技术研究中心

2.云南省农业科学院园艺科学研究所

关键词： 云南红梨;PyMT;序列分析;原核表达;重金属抗性

期刊名称： 生命科学研究

ISSN： 1007-7847

年卷期： 2011 年 15 卷 06 期

页码： 485-492

收录情况： CSCD

摘要： 金属硫蛋白(metallothioneins,MTs)是一种在生物中普遍存在的多功能蛋白.根据云红梨1号光特异性差减文库中获得的PyMT(Pyrus pyrifolia metallothionein)基因序列,PCR扩增4种红梨PyMT的基因组序列并进行序列分析;通过RT-PCR方法从云红梨1号果皮中扩增出PyMT基因,并将其命名为PyMT1(Pyrus pyrifo-lia metallothionein 1).构建原核表达载体pGEX-4T-1-PyMT1,在E.coli BL21中进行表达;通过在液体培养基中添加不同浓度的重金属离子,检测转化菌和对照菌的的生长曲线,分析PyMT1的功能.序列分析表明,PyMT1是典型的Metallothion 2.PyMT1氨基酸序列系统发育分析表明,PyMT1与MdMT亲缘关系最近.SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期的大小一致;生长曲线结果表明工程菌对重金属离子Zn、Cu、Cd具有一定的耐受性.这些结果为进一步纯化、鉴定目的蛋白和研究其结构和功能奠定了基础.

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