文献类型： 中文期刊

作者： 王彩云 ¹ ; 李富生 ¹ ; 李涛 ² ; 李彩霞 ² ; 张晓东 ² ; 王元忠 ³ ;

作者机构： 1.云南农业大学农学与生物技术学院

2.玉溪师范学院资源与环境学院

3.云南省农业科学院药用植物研究所

关键词： 滇龙胆;牻牛儿基焦磷酸合成酶基因;基因克隆;序列分析;原核表达

期刊名称： 中草药

ISSN： 0253-2670

年卷期： 2014 年 45 卷 14 期

页码： 2060-2068

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的从滇龙胆Gentiana rigescens幼叶中克隆单萜化合物合成的关键酶牻牛儿基焦磷酸合成酶基因GrGPPS,进行序列特征分析和原核表达。方法根据三年生滇龙胆转录组GrGPPS基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增得到GrGPPS cDNA序列,并进行TA克隆、测序及序列分析;构建原核表达载体pGEX-4T-1-GrGPPS,转入Escherichia coli Rosetta(DE3)中,在37℃、1.0 mmol/L IPTG诱导下进行表达。结果 GrGPPS cDNA全长1 107 bp,编码369个氨基酸;序列分析表明,GrGPPS基因是异戊烯基合成酶家族的成员;氨基酸序列系统发育分析表明,GrGPPS与金鱼草AmGPPS亲缘关系最近;构建pGEX-4T-1-GrGPPS重组质粒,获得稳定的pGEX-4T-1-GrGPPS原核表达体系。SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。结论克隆了GrGPPS基因,建立pGEX-4T-1-GrGPPS稳定的原核表达体系,为进一步纯化和鉴定GPPS蛋白并研究其结构和功能奠定基础。