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桑树几丁质酶基因Machi1的克隆及原核表达

文献类型： 中文期刊

作者： 肖圣燕 1 ; 朱峰 1 ; 冉瑞法 1 ; 李镇刚 1 ; 张永红 1 ; 邵榆岚 1 ; 唐芬芬 1 ; 白兴荣 1 ;

作者机构： 1.云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所

关键词： 桑树;几丁质酶;基因克隆;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 蚕业科学

ISSN： 0257-4799

年卷期： 2019 年 005 期

页码： 634-642

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以桑品种云桑2号的健康叶片为材料,通过反转录PCR结合RACE方法克隆到桑树几丁质酶基因Machi1(GenBank登录号:MK783295).Machi1基因的完整ORF序列长度为972 bp,编码323个氨基酸残基,预测Machi1蛋白分子质量为349kD,理论等电点(pI)为684.结构分析显示Machi1蛋白含有一个信号肽,无跨膜结构域.Machi1蛋白属于糖苷水解酶19家族,含有保守的ChtBD1结构域,预测具有几丁质酶活性.多序列比对结果表明,Machi1蛋白与川桑几丁质酶Mnchi19一致性最高为935%,系统进化树结果与之相一致.组织表达模式分析结果表明,Machi1基因在桑树叶片中的表达量最高.随后通过原核表达系统获得了重组目的蛋白并进行了纯化,用纯化的蛋白质免疫新西兰大白兔制备Anti-Machi1多克隆抗体.利用间接ELISA法测定其效价在1∶80 000以上,并经Western blotting验证了该多克隆抗体的特异性,为后续研究Machi1的抗病机制及生物学功能奠定了基础.

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