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秋水仙碱提取分离研究进展
《江苏农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：秋水仙碱是一种功能较多的植物源生物碱,在医药行业发挥着重要作用.系统地了解秋水仙碱提取、分离的技术类型有助于推动高纯度秋水仙碱的生产.本文介绍了秋水仙碱不同提取技术的特点、原理和应用效果,阐述了秋水仙碱在不同种类植物、植物不同部位中的含量以及影响含量的因素,总结了传统的浸提法、回流法与超声波提取、超临界CO2提取、微波提取、酶促提取等新提取方法,以及膜分离法、色谱分离法等秋水仙碱分离纯化方法的研究进展,分析了不同提取分离技术的效果和影响因素,探讨了秋水仙碱提取技术的发展方向,以期为秋水仙碱的提取分离技术的研究和应用提供参考.
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中国桔梗PgF3'5'H及其突变型基因在毕赤酵母中的表达差异分析
《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：F3’5’H是催化合成蓝色花色素的关键酶,F3’5’H蛋白序列中一段编码9个氨基酸的特殊序列区段可能与F3’5’H催化合成的蓝色花色素有关,但该特殊序列区段的催化功能和作用机制尚不清楚。为了探究PgF3’5’H中,该特殊序列结构的催化功能及作用机制,本研究通过重叠延伸PCR技术去除PgF3’5’H编码的9个氨基酸特殊序列区段,获得缺失突变型基因;将PgF3’5’H野生型及其突变型基因同时导入毕赤酵母;通过qRT-PCR检测野生基因及其突变基因在酵母中转录水平基因表达量的差异;通过SDS-PAGE检测PgF3’5’H野生型基因及其突变型基因在酵母中的合成蛋白量的差异。qRT-PCR分析结果显示PgF3’5’H野生型基因较其突变型在酵母中呈现更高的表达量;SDS-PAGE电泳结果显示重组子分泌生成了分子量大小约为52.020k20D的目标蛋白,且野生型蛋白量相比其突变型蛋白量高。因此,推测Pg20F3’5’H蛋白序列中9个氨基酸的特殊序列与调控该基因在RNA和蛋白水平的表达量有关,进而可能影响该基因的催化功能。研究结果将为观赏植物蓝色花色形成分子机制及蓝色花色分子育种提供一定研究基础。
关键词： 中国桔梗 PgF3’5’H 毕赤酵母 基因表达 蛋白表达
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钝裂银莲花花色素合成相关基因qRT-PCR内参基因的筛选
《园艺学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了筛选适合于钝裂银莲花类黄酮/花青素合成途径中相关基因q RT-PCR表达分析时的内参基因,根据钝裂银莲花蓝/白不同花色花器官组织的转录组测序结果,选取了多聚泛素酶基因（polyubiquitin,UBQ）、微管蛋白基因（β-tubulin,β-TUB）、水通道蛋白基因（aquaporin,AQP）、肌动蛋白基因（actin,ACT）、甘油醛–3–磷酸–脱氢酶基因（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH）、组蛋白基因（histone,HIS）、转录延伸因子基因（elongation factor 1-β,EF-1β）和60S核糖体蛋白基因（60S ribosomal protein L13-1,RPL13）等8个常用内参基因作为候选基因,以钝裂银莲花的叶片、茎杆和蓝/白色花器官等不同组织为试验材料,通过qRT-PCR检测这8个候选内参基因的表达情况,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件对其稳定性进行分析评价。结果表明:8个候选内参基因中,UBQ表现最稳定,而β-TUB相对稳定性最差。以最稳定的UBQ为内参对钝裂银莲花类黄酮/花青素合成途径中16个相关基因表达情况进行q RT-PCR分析,结果与前期转录组测序结果一致。UBQ为钝裂银莲花花色素合成途径相关基因表达分析的最适内参基因。
关键词： 钝裂银莲花 实时荧光定量PCR 内参基因 筛选 稳定性 类黄酮/花青素合成途径
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氮磷钾施肥水平对百合切花与籽球品质的影响
《中国农学通报 》 2021 CSCD
摘要：为比较氮磷钾肥对百合切花与籽球生长的影响,以OT百合品种'黄金甲'为试验材料,研究氮、磷、钾肥不同施肥水平对百合切花和籽球品质性状的影响.结果表明,施用氮肥可使百合籽球的干重和围径增加,磷肥对籽球的干、鲜重及围径、直径增长有促进作用,钾肥量100、200 kg/hm2可使籽球生长量增大,但施钾300 kg/hm2会使籽球生长量减小.肥效以磷肥最明显,其次为钾肥和氮肥,磷肥施用量为50 kg/hm2时,籽球生长量最大.施用磷、钾肥可促进切花的株高、叶长、叶宽、叶面积和花径增大,而施氮处理中植株的各性状没有明显改变,钾肥与磷肥的施用量各为100 kg/hm2时肥效接近,但施磷处理的花径增大更多.综上,籽球对氮肥的需求大于切花,施用磷钾肥可提高籽球和切花品质质量,但切花与籽球对磷钾肥的肥效反应不同,磷肥施用量籽球宜为50 kg/hm2、切花宜为100 kg/hm2,钾肥则均可为100 kg/hm2,氮肥不宜单独施用.
关键词： 百合;氮磷钾;切花;籽球;施肥效应
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30种观叶秋海棠花粉活力检验方法筛选及活力测定
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解观叶秋海棠不同种类花粉活力,对育种具有重要意义。【方法】采用TTC染色、I2-KI染色、孢粉染色法以及离体萌发培养方法检测秋海棠花粉活力,比较不同检测方法和不同种类之间花粉活力大小的差异。【结果】孢粉染色法较其他3种方法测定效果好;30种观叶秋海棠花粉均有活力,花粉活力范围为34.83%～98.58%,花粉活力橙花秋海棠最高,火焰最低;不同种类间花粉活力差异大,11个野生种和1个商业品种的花粉活力均高于90%,花粉活力在80%～90%和70%～80%的种或品种各有6个,60%～70%的有3个,冰川花粉活力稍低,为58.61%,小可爱（43.88%）和火焰（34.83%）的则更低,不到50%;另外火焰不同开放天数雄花的花粉活力随开放天数的增加呈先增大后减小趋势,开花5 d花粉活力最高（42.15%）,雌花自开放到凋落,其柱头均有可授性。【结论】孢粉染色法可以快速有效的测定秋海棠植物花粉活力,秋海棠花粉活力多样性丰富,28个种类正常可育,杂交时可作父本,2个种类为低不育,更适合做母本,火焰若做父本,应采集开放5 d的花粉,该项研究对提高杂交效率具有实际指导意义。
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基于iTRAQ技术对亚洲百合与铁炮百合的柱头蛋白分析
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：柱头在花粉黏附、水合和花粉管生长中具有重要作用,柱头蛋白参与多种生物学过程.为比较亚洲百合与铁炮百合的柱头蛋白质差异,本研究以亚洲百合'Brunello'和铁炮百合品种'White Heaven'为试验材料,利用iTRAQ技术分析两种百合的柱头蛋白差异.结果表明亚洲百合和铁炮百合的柱头蛋白总数为3 963,参与的主要生物过程为代谢过程、细胞过程和刺激应答.定量分析结果表明,241个蛋白在2种百合的柱头上差异显著,功能涉及碳水化合物与能量代谢和运输、脂质运输和代谢、蛋白代谢、细胞壁/膜/包膜生物发生、无机离子转运和代谢、信号转导和辅酶转运和代谢等,其中涉及碳水化合物与能量代谢的差异蛋白数量较多.本研究为深入了解百合远缘杂交过程中柱头亲和性差异的分子机制提供技术数据.
关键词： 百合(Lilium hybrids) iTRAQ 柱头 差异蛋白
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泸定百合丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因(LsS/TK)的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：本研究根据从之前已构建的百合尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum f. sp. lilii)诱导的泸定百合(Lilium sargentiae Wilson) SSH文库中筛选到的一个S/TK EST序列,通过RACE结合RT-PCR技术克隆到1个泸定百合S/TK基因全长cDNA序列,该基因全长2 016 bp,开放阅读框长1 440 bp,编码479个氨基酸,命名为LsS/TK.保守域结构分析表明Ls S/TK具有典型的S/TK激酶保守亚结构域.进化树分析结果显示LsS/TK与拟南芥的APTK19的进化关系最近,而与其它植物的S/TK的进化关系都较远.实时定量PCR结果显示百合镰刀菌诱导后LsS/TK表现上调表达,推测该基因可能在一定程度上参与泸定百合抗镰刀菌病害途径.
关键词： 泸定百合(Lilium sargentiae Wilson) 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 LsS/TK
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食用百合生态适应性及离体繁殖差异
《江苏农业科学 》 2019
摘要：以兰州百合、川百合、卷丹、龙牙百合为材料,研究4种百合土壤栽种时的物候期、鳞茎生长量、株高及鳞茎在培养基上培养的不定芽增殖倍数、分化率差异。结果表明,卷丹发芽相对最早,龙牙百合发芽晚于其他3种百合1～2周;兰州百合苗期短、开花早,枯萎期历时长达8周;4种百合采收时鳞茎鲜质量增加值由高到低依次为卷丹>龙牙百合>川百合>兰州百合,其中,卷丹鳞茎鲜质量增加相对最高,为33.92 g,龙牙百合围径增加相对最大,为4.35 cm;兰州百合在6-BA、NAA浓度分别为1.5、0.5 mg/L的培养基上其不定芽增殖芽增殖倍数相对最高,为5.75倍;兰州百合、川百合鳞茎不定芽分化率分别为96%、94%,卷丹、龙牙百合鳞茎不定芽分化率则低于90%,兰州百合、川百合鳞茎离体繁殖效率高于卷丹、龙牙百合。
关键词： 食用百合 兰州百合 川百合 卷丹 龙牙百合 物候期 鳞茎生长量 株高 不定芽
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西南鸢尾花色变异实时定量PCR内参基因的筛选与验证
《核农学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为筛选适用于不同花色西南鸢尾花色合成途径相关基因表达分析的内参基因,本研究根据西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾花蕾组织的转录组测序数据,筛选了6个常用内参基因(ɑ-TUB、β-TUB、AQP、ACT、GAPDH、UBQ),同时以百合18S做为对照内参基因,在西南鸢尾及其白花变型白花西南鸢尾的花蕾组织中,分别通过反转录PCR(RT-PCR)初筛和RT-qPCR检测表达量,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件对7个候选内参基因的稳定性进行评价。RT-PCR初筛结果显示,7个候选内参基因引物的特异性均较好,在6个样品间没有明显差异; RT-qPCR分析表明,7个候选内参基因的表达量存在一定差异,其中18S表达量最高,UBQ最低; geNorm、NormFinder和BestKeeper分析结果表明,ACT表现最稳定,最适合做为内参基因,β-TUB相对稳定性最低;以Actin为内参对西南鸢尾类黄酮/花青素和类胡萝卜素2类色素合成途径中部分相关基因的RT-qPCR分析结果与转录组测序结果相一致。本研究为鸢尾属植物花色素合成相关基因表达分析内参基因的筛选以及鸢尾属植物资源利用和花色育种研究提供了理论参考。
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川乌头F3′5′H基因在矮牵牛中的遗传转化及功能分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：类黄酮3',5'羟基化酶(flavonid-3', 5'-hydroxylase, F3'5'H)是花色素苷合成途径中催化蓝色花色素飞燕草色素合成的关键酶.为验证川乌头(Aconitum carmichaeli Debx.) Ac-F3′5′H基因的催化功能,构建了该基因的植物过表达载体,利用农杆菌介导法将Ac-F3′5′H遗传转化矮牵牛.通过抗性筛选共得到6株在潮霉素抗性培养基上可正常生长的矮牵牛植株,经PCR和RT-PCR验证共得到5株转基因阳性植株,其中2株中目标基因表达量相对较高.相比对照,这2株转基因矮牵牛阳性植株花色变化较明显,由粉色变为紫蓝色,表明该基因可催化合成一定的蓝色花色素.该结果将为观赏植物蓝色花色分子育种工作提供一定的科学依据.
关键词： 川乌头 Ac-F3′5′H基因 遗传转化 功能验证
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