科研产出
百合抗病无性系抗枯萎病的蛋白质组学分析
《园艺学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以百合抗病无性系和感病无性系为试验材料,开展了百合抗尖孢镰刀菌枯萎病的蛋白质组学研究,以期明确抗病无性系参与抗病反应的关键蛋白。利用蛋白质双向凝胶电泳技术,对被百合尖孢镰刀菌诱导0、24、48和72 h的抗病无性系和感病无性系进行差异蛋白分析。经质谱检测及数据库检索,鉴定了25个差异蛋白质点,其中10个鉴定为未知功能的蛋白,其余15个依据其相关功能分为4类,即防御反应相关蛋白、光合作用相关蛋白、糖类及能量代谢相关蛋白和热激蛋白。其中参与防御反应的病程相关蛋白(推定的抗病蛋白RPS2、推定的抗晚疫病同族蛋白R1C-3、过氧化物酶Q、抗坏血酸过氧化物酶和NBS-LRR类似蛋白)可能是百合抗病无性系介入抗病防御反应的关键蛋白。
关键词： 百合 总蛋白提取 双向电泳 尖孢镰刀菌百合专化型 差异蛋白质组
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百合总蛋白质提取及双向电泳技术体系优化
《分子植物育种 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：本研究以百合组培苗叶片为试验材料,研究不同蛋白提取方法的得率、电泳上样量及聚焦除盐时间对双向电泳图谱的影响。结果表明:采用三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取百合叶片蛋白质比Tris-HCl法效果好,蛋白得率为38.5 mg/g,且颜色较白,获得的2-DE图谱较好;上样量为600μg时得到的图谱分辨率高、蛋白斑点分布均匀、清晰;等电聚焦(Iso-electrofocusing,IEF)中的2个除盐步骤的时间分别为2 h和2.5 h时,可以较好地去除盐分,顺利完成聚焦并得到较好的双向电泳图谱。该体系的建立将为下一步百合蛋白质组学研究及利用分子育种技术培育抗病品种提供技术资料。
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白叶枯病菌胞内蛋白的提取及电泳分离方法的构建
《基因组学与应用生物学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利用两种等点聚焦程序(IEFⅠ,IEFⅡ)进行一向等电聚焦,用三种蛋白上样浓度(400μg,600μg,800μg)进行双向电泳,G-250烤染后,通过Imagemaster软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,裂解液沉淀法、等电聚焦程序Ⅱ(IEFⅡ)、600μg上样浓度三者相结合的方法是提取和分离白叶枯病菌胞内蛋白的理想方法,能获得较好的实验效果。该方法的建立为白叶枯病菌蛋白质组学研究奠定基础。
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干旱胁迫条件下马铃薯耐旱品种宁蒗182叶片蛋白质组学分析
《遗传 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：开展马铃薯抗旱分子机理的研究对培育马铃薯抗旱品种,减少干旱造成的损失至关重要。文章利用双向电泳技术对云南地方耐旱马铃薯品种宁蒗182在干旱与正常处理条件下叶片表达差异蛋白质组进行对比研究。经电泳图谱分析和MALDI-TOF-TOF/MS质谱鉴定获得12个表达差异蛋白点,并进行了功能分类。结果发现,在差异蛋白中具有保护马铃薯光和系统以及线粒体正常运转的酶类;调节该植株对环境胁迫响应的信号传导以及调控其组织内N、C运输系统的功能蛋白,这些蛋白在受到干旱胁迫时表达量均升高。这一结果揭示出该类蛋白是马铃薯在干旱条件下产生的耐受相关蛋白。文章为阐释马铃薯抗旱品种通过多种路径和水平的调控提高其抗性的分子机理提供了理论依据。
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用双向电泳-质谱初步分析大熊猫初乳和常乳中差异表达的乳清蛋白
《西南民族大学学报(自然科学版) 》 2013
摘要：目的是分析大熊猫初乳和常乳中差异表达的乳清蛋白.利用双向电泳-质谱技术首次对一只大熊猫产后第1 d和第22 d的乳清蛋白进行初步的分离与鉴定,结果成功得到11种差异表达的蛋白质,值得注意的是,其中有3种蛋白质与免疫、抗菌有关,包括抗白细胞蛋白酶、溶菌酶C、C反应蛋白.推测这3种蛋白质可能参与大熊猫乳腺或幼仔的防御功能.研究结果表明,用双向电泳-质谱技术可以分析大熊猫初乳和常乳中的差异表达蛋白质,有助于认识大熊猫乳的组成和功能特性.
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氮胁迫条件下稻瘟病菌菌丝体蛋白质组学研究
《扬州大学学报(农业与生命科学版) 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：采用改进的三氯乙酸/丙酮法,对稻瘟病菌菌丝体蛋白质进行双向电泳,获得了高分辨率电泳图谱,较改进前三氯乙酸/丙酮法蛋白质点数量平均提高687个点。在等电点pI 3～10和4～7范围内,电泳图谱上可分别检测到(500±40)及(984±70)个蛋白点。利用该方法对氮胁迫条件下稻瘟病菌菌丝体蛋白质进行双向电泳,在pI 4～7范围内电泳图谱上检测到(1 169±90)个蛋白点。通过加强对样品的清洗结合丙酮对蛋白质在水化液中的二次沉淀,能较好地除去样品中杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于稻瘟病菌菌丝体蛋白质组的研究,并获得了更加理想的效果。
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玉米幼苗根、茎、叶总蛋白质双向电泳方法的优化
《西南农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。
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马铃薯宁蒗182叶片蛋白质双向电泳技术的优化及其经济价值意义
《经济问题探索 》 2012 北大核心
摘要：以马铃薯宁蒗182叶片为试验材料,研究其叶片蛋白质提取方法及不同的蛋白质样品电泳上样量和IPG胶条pI范围对双向电泳图谱的影响。结果表明:采用改进的三氯乙酸(TCA)/丙酮法,上样量为600μg,采用pI 4-7、24 cm的IPG胶条可获得高分辨率的电泳图谱。在等电点4-7范围内,马铃薯宁蒗182叶片电泳图谱上的蛋白质点数为1055±95个。叶片蛋白质点的分布在分子量25-75 kD和等电点5-6的范围内相对集中。通过加强对样品的清洗结合丙酮对蛋白质在水化液中的二次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于马铃薯叶片总蛋白质双向电泳的试验研究,并为进一步利用基因工程技术改良马铃薯奠定了实验基础,将为马铃薯产业的发展带来经济效益和社会效益。
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