番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备

郑宽瑜; 尚卫娜; 张洁; 郑雪; 董家红; 《生物技术通报 》 2017 北大核心 CSCD

摘要：通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。

关键词： 番茄环纹斑点病毒 Gn蛋白 原核表达 抗血清

番茄环纹斑点病毒非结构蛋白NSs的原核表达及多抗血清制备

郑宽瑜; 董家红; 尹跃艳; 方琦; 苏晓霞; 张仲凯; 《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：用RT-PCR从感染番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的番茄中扩增出编码病毒非结构蛋白NSs基因,将NSs基因构建到原核表达载体p ET-30 a中,获得原核表达载体p ET-30a-NSs,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDSPAGE电泳分析显示,高效诱导表达了57k Da融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/8192。用制备好的抗血清对TZSV感病病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清可用于TZSV的检测,并为进一步研究NSs功能奠定了基础。

关键词： 番茄环纹斑点病毒 非结构蛋白 原核表达 抗血清 检测

柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因原核表达及多抗血清制备

尹跃艳; 董家红; 岳建强; 栗艳琼; 陈伟; 张仲凯; 《云南大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：在云南发现的柑橘衰退病毒柠檬分离物对云南省德宏州的柠檬产业造成较大危害.通过用NdeⅠ和XhoⅠ对柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因进行双酶切,定向插入到表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21,经IPTG在28℃下诱导6 h后,SDS-PAGE电泳显示,在25 kDa处有特异表达谱带,回收特异蛋白带作为抗原免疫家兔,制备出特异抗血清.间接ELISA测得效价为1∶3000,并且与CTV具有良好的特异性反应.

关键词： 柑橘衰退病毒柠檬分离物 外壳蛋白 原核表达 抗血清

水稻矮缩病毒昆明分离物抗血清制备及免疫捕捉PCR检测

彭潞波; 李婷婷; 魏春红; 方琦; 董家红; 张丽珍; 苏晓霞; 丁铭; 张仲凯; 李毅; 《Virologica Sinica 》 2006 CSCD

关键词： 水稻矮缩病毒 抗血清 间接ELISA 免疫捕捉PCR

侵染马铃薯的一个Tospovirus混合分离物的鉴定、纯化及多抗血清制备

丁铭; 张丽珍; 方琦; 李婷婷; 苏晓霞; 李展; 张仲凯; 《西南农业学报 》 2004 CSCD

摘要：在昆明地区栽培的马铃薯病株上分离鉴定出含有番茄斑萎病毒属(Tospovirus)番茄斑萎病毒(Tomatospotted wilt virus,ISWV)和花生环斑病毒(Groundnut ringspot virus,GRSV)。利用蔗糖垫及差速离心法提纯了该混合分离物,提纯病毒免疫家兔5次,得到TSWV和GRSV的混合抗血清,所制备的抗血清经间接ELISA测定效价为1:2560。

关键词： 马铃薯 TSWV GRSV 抗血清