科研产出
青蒿中番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒的分子鉴定及相关序列分析
《植物保护 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt virus, TSWV）和烟草花叶病毒（tobacco mosaic virus, TMV）是2种重要的植物病原病毒，对多种经济作物的产量和品质均造成严重影响。2021年-2022年，在云南省丽江市烟草种植区不同烟区采集叶片黄化、皱缩以及无症状的青蒿Artemisia caruifolia样品共计14份，利用免疫金标速测卡和RT-PCR对其病原病毒进行检测。利用免疫金标速测卡检测结果显示，在所检样品中有9份样品检测出TSWV,检出率为64.28%,有3份样品检测出TMV,检出率为21.43%,2种病毒复合侵染的检出率同样为21.43%;利用RT-PCR对复合侵染的3份样品进行分子检测，结果显示，在3份复合侵染青蒿样品中获得3条TSWV N基因序列、3条TMV cp基因序列和2条TMV RdRp部分序列。TSWV青蒿分离物与分离自云南的TSWV-2分离物相似性最高，为99.6%;TMV青蒿分离物与分离自辽宁的TMV-Shenyang分离物和分离自云南的TMV-Yongren-1相似性最高，均大于99.4%。这是首次发现TSWV和TMV 2种不同属病毒复合侵染青蒿。
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侵染鸢尾的番茄斑萎病毒鉴定
《园艺学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：2020年,在云南中医药大学校园发现叶片表现褪绿斑点、坏死环斑症状的鸢尾植株。用电子显微镜在病叶汁液中观察到典型的正番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒粒子。在用感病叶片汁液摩擦接种的普通烟、本生烟上观察到系统坏死斑症状,中国辣椒（PI152225）的接种叶片出现局部坏死斑,但无系统侵染。为进一步明确病原,用RT-PCR扩增番茄斑萎病毒（tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）的NSs和N基因,序列测定发现,分别与分离自云南番茄和旱金莲的TSWV分离物具有最高的氨基酸序列相似性（99.79%和100%）。结果表明引起鸢尾褪绿斑点病的病原是番茄斑萎病毒。
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莴笋感染番茄斑萎病毒(TSWV)——病毒粒子分布与亚细胞病变特征
《电子显微学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：莴笋是西藏昌都市露地栽培的主要蔬菜种类之一，近年来斑萎病发生普遍，发病率达到了80%以上，引起严重的经济损失，前期研究表明发病植株受到番茄斑萎病毒(TSWV)侵染。为明确该区域莴笋感染TSWV不同时期病毒粒体分布与亚细胞病变的特征，为病毒病的精准诊断与绿色防控提供依据，本研究采集了西藏昌都市卡若区莴笋不同发病时期的样品，应用TSWV-N基因序列设计引物，通过RT-PCR扩增克隆与测序分析，根据N基因序列推导N蛋白氨基酸序列比对，明确采集样品受到TSWV侵染。采集不同发病时期的样品进行负染色和超薄切片制样透射电子显微镜观察，发现早期感病叶片(症状为轻微褪绿)中病毒粒体相对含量较少，TSWV粒体分布于细胞质中，叶绿体噬锇颗粒明显增加，线粒体嵴膜部分降解，少部分细胞的液泡内有较多TSWV粒体聚集于细胞质内的囊泡中；中期感病叶片(褪绿或黄化斑)中，病毒粒体相对含量较高，较多TSWV粒体聚集于细胞质内质网池中，叶绿体膜系统降解，噬锇颗粒增加，线粒体增多；后期感病叶片(坏死斑)中，病毒粒体相对含量高，叶绿体、线粒体等细胞器降解，有大量TSWV病毒粒体聚集于残存的细胞质内囊泡中。TSWV粒体相对含量和亚细胞病变程度与植株症状严重度呈正相关，发病早期和后期TSWV粒体在细胞质内囊泡中的聚集为首次发现。上述结果为莴笋感染TSWV的早期诊断和确诊提供了新的依据，可为高原地区TSWV引起的莴笋病毒病的早期预防提供指导。
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西藏昌都市卡若区蔬菜主要病毒检测及番茄斑萎病毒鉴定
《植物保护 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为明确西藏昌都市卡若区高原条件下的蔬菜主要病毒种类,对温室、大棚和露地栽培的主要蔬菜进行了病毒病调查,采集典型病毒病症状样品进行ELISA检测,明确病毒种类;并利用电子显微镜观察,RT-PCR扩增克隆与测序分析对主要病毒进行鉴定分析.ELISA检测结果表明,西藏昌都市卡若区温室及大棚栽培的番茄、辣椒和莴苣上的主要病毒有番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)、马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)及凤果花叶病毒(pepino mosaic virus,PepMV).其中TSWV检出率最高,为45%.进一步对检出TSWV的蔬菜样品进行电子显微镜观察,发现其中含有典型的正番茄斑萎病毒属Orthotospovirus病毒粒体,应用TSWV-N基因特异性引物进行RT-PCR扩增克隆和序列分析,发现西藏昌都市卡若区蔬菜感染的TSWV与云南TSWV分离株亲缘关系最近.本研究结果明确了西藏昌都市卡若区蔬菜的主要病毒种类.综合抗体检测、病毒粒体形态观察与分类相关基因的克隆测序结果,明确了西藏昌都市卡若区蔬菜感染的主要病毒为TSWV.这也是TSWV在西藏的首次报道,为了解TSWV的发生分布及其防控提供了依据.
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番茄斑萎病毒2个非结构蛋白VIGS体系的初步构建
《西南林业大学学报(自然科学) 》 2022 北大核心
摘要：将番茄斑萎病毒（TSWV）的NSm、NSs基因200 bp左右构建到pTRV-PTV00沉默载体上，通过农杆菌GV3101浸润本氏烟。注射10 d左右，待注射PDS基因的植株发白，将注射pTRV-PTV00-NSm、pTRV-PTV00-NSs以及pTRV-PTV00载体的植株接种TSWV，显症后采集系统叶（接种叶上一叶）应用实时荧光定量PCR检测NSm、NSs基因表达量。通过测定NSm、NSs基因表达量发现NSm基因的沉默效率为86.7%、NSs基因的沉默效率为92.00%。结果表明：通过pTRV-PTV00载体构建NSm、NSs基因沉默载体沉默效率接近90.00%，此载体适用于病毒基因沉默载体的构建，且NSm、NSs基因沉默载体能应用后续基因功能研究。
关键词： 本氏烟 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 非结构蛋白 实时荧光定量PCR
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贝壳杉烯酸诱导烟草的系统获得性抗性防御番茄斑萎病毒侵染
《西南农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】番茄斑萎病毒（TSWV）在全球范围内广泛发生,危害多种作物引起严重的经济损失,筛选应用具有高效抑制活性的天然产物是防控TSWV引起的病害有效途径之一。前期研究发现三列叶蟛蜞菊（Wedelia trilobata）中提取的贝壳杉烯酸（AHK）具有抑制TSWV侵染的活性,本研究探明其具体的抑制机制。【方法】通过测定接种TSWV前、后用AHK处理的烟草植株相关防御酶活性以及RT-qPCR检测抗性相关主要代谢通路关键转录因子基因表达量,解析AHK防御TSWV侵染的机制。【结果】AHK在病毒接种前后处理中能诱导超氧化物歧化酶（SOD）活性升高而抑制TSWV的侵染;同时AHK能诱导茉莉酸（JA）通路重要转录因子MYC2、NAC表达量升高,增强了系统获得抗性。【结论】AHK主要通过诱导SOD酶活升高以及诱导JA通路增强寄主系统抗性从而抑制TSWV的侵染,具有作为植物源农药研发的潜力,为TSWV引起的病毒病绿色防控积累基础。
关键词： 番茄斑萎病毒 贝壳杉烯酸 超氧化物歧化酶 茉莉酸通路 系统抗性
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TSWV感染番茄叶片组织的BSE成像和精细定位
《电子显微学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：超薄切片制样透射电子显微镜观察病毒粒体在细胞中的聚集特征及其与亚细胞的相互作用是植物病毒诊断鉴定及致病性研究的基础,但存在视野小、因载网遮挡而信息不全的局限。本研究对目前蔬菜及其它重要经济作物生产上发生为害严重的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus, TSWV)侵染番茄叶片的200 nm切片,进行扫描电镜背散射电子信号观察,利用软件进行拼图,首次获得该病毒侵染番茄叶片组织的大尺度图像(～150μm×～520μm)。同时兼顾高分辨的亚细胞定位,对TSWV粒体在侵染的叶片组织中从上表皮、筛管、导管及下表皮细胞中的分布特征进行了解析,首次发现叶毛和海绵组织细胞间隙中分布TSWV粒体,并与常规超薄切片(70 nm)透射电子显微镜观察结果进行比较分析。两种方法结合可提高TSWV侵染的亚细胞病变诊断效率,对植物病毒的精准诊断鉴定和致病机理研究具有重要的参考价值。
关键词： 番茄斑萎病毒 大尺度图像 背散射电子成像 病毒粒体 分布特征
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云南省马铃薯病毒及蓟马优势种发生趋势
《中国农业科学 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确云南省马铃薯病毒的优势种及马铃薯新病毒的发生变化,为马铃薯种苗、种薯的生产提供早期预警监测,并为防止新的病毒病害暴发流行提供依据。【方法】采用随机五点取样法,从云南马铃薯春作区和冬作区的不同田块采集各地主栽马铃薯品种的叶片,共采集到510份植株叶片,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法中的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)和间接ELISA(I-ELISA)两种方法进行病毒检测。进行蓟马采集时,同样采用随机五点取样法,从云南马铃薯春作区和冬作区采集各地主栽马铃薯品种的花和叶片,将样品放入采集罐后带回实验室,对罐中的蓟马进行整理,共采集到8 953头蓟马。将蓟马制作为临时玻片标本,参考中国蓟马属蓟马检索表及Oz Thrips(http://www.ozthrips.org/),通过形态学特征对蓟马进行种类鉴定。【结果】从510份马铃薯样品中,共检测出6种常见病毒和2种新兴病毒。马铃薯病毒的优势种为马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS),检出率高达63.53%,其次是马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV);检测出2种新兴病毒番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)和番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV),检出率分别为5.10%和15.10%。本次调查共鉴定了3科,5属,13种蓟马。蓟马科(Thripidae)共鉴定出3个属11个种,分别为蓟马属(Thrips)的八节黄蓟马(T.flavidulus)、黄蓟马(T.flavus)、棕榈蓟马(T.palmi)、烟蓟马(T.tabaci)、黄胸蓟马(T.hawaiiensis)、色蓟马(T.coloratus)、暗足蓟马(T.obscuripes)和葱韭蓟马(T.alliorum);花蓟马属(Frankliniella)的西花蓟马(F.occidentalis)、花蓟马(F.intonsa);带蓟马属(Taeniothrips)的大带蓟马(Ta.major);管蓟马科(Phlaeothripidae)简管蓟马属(Haplothrips)的简管蓟马(Haplothrips sp.)和纹蓟马科(Aeolothripidae)纹蓟马属(Aeolothrips)的纹蓟马(Aeolothrips sp.)。检测出的8种病毒中TSWV和TZSV是蓟马传播的病毒,其中,西花蓟马是潜在传毒蓟马群体中的优势种,占潜在传毒蓟马群体总数的69.47%。【结论】目前,PVS是云南马铃薯主要病毒优势种,2种侵染马铃薯的新兴病毒的发生率也在增加。西花蓟马是潜在传毒蓟马群体中的优势种。
关键词： 马铃薯 病毒病 蓟马 番茄斑萎病毒 番茄环纹斑点病毒
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番茄斑萎病毒N基因的VIGS载体构建
《植物病理学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)严重危害多种经济作物和园艺植物,其N基因与病毒的侵染力密切相关,将N基因直接构建到VIGS载体上研究其致病功能目前鲜见报道.本研究将TSWV N基因构建到pTRV-PTV00载体上,注射本氏烟,通过qRT-PCR定量分析发现先接种TSWV后注射沉默载体的植株抗TSWV效率达57.60%,先注射沉默载体后接种TSWV的植株抗TSWV效率达99.14%.结果表明先注射载体后接种TSWV的N基因沉默效率更高.TSWV N基因VIGS载体的构建可为研究N基因在病毒致病等方面的功能提供前期材料,并为TSWV抗病育种和田间绿色防控提供一定的理论依据.
关键词： 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 实时荧光定量PCR 烟草脆裂病毒
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陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特点
《西南农业学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探明陆良莴苣类蔬菜斑萎病的侵染循环及其发生流行特征,为绿色防控提供指导。【方法】调查和采集不同发病时期的莴苣类蔬菜斑萎病样品、田间可能的中间寄主杂草与作物、苗棚种苗,应用ELISA检测、电子显微镜负染色与超薄切片观察,确定陆良莴苣类蔬菜斑萎病伴随的病毒种类、侵染循环及其发生流行特征。【结果】陆良莴苣类蔬菜斑萎病的发病率在15%～36%,伴随的病毒仅有番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt Orthotospovirus,TSWV）,细胞病理观察表明生菜斑萎病样品的细胞中仅分布TSWV粒体。TSWV的中间寄主有鬼针草,以及辣椒、马铃薯、烟草等作物。苗棚生菜种苗中TSWV的检出率100%。【结论】陆良莴苣类蔬菜主要病害是由TSWV侵染引起的斑萎病,TSWV在周年分布的鬼针草中形成初侵染源,通过传毒介体蓟马传播到莴苣类蔬菜种苗以及中间寄主作物辣椒、马铃薯、烟草等作物,并在夏秋蔬菜生产季节在这些作物及杂草之间相互传播,形成侵染循环。种苗带毒是陆良莴苣类蔬菜发病率高的主要原因,中间寄主植物的分布、蓟马传播与农事操作进一步加剧斑萎病的发生流行。
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