科研产出
田头菇属真菌信息素受体基因保守区克隆及多态性分析
《应用与环境生物学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：真菌信息素受体基因控制着真菌有性生殖过程,研究其序列组成的保守性和多态性对于认识真菌系统进化规律具有重要意义.利用简并引物从杨柳田头菇(Agrocybe salicacola)和茶树菇(A.aegerita)两种食用菌的16个野生菌株中扩增获得51条信息素受体基因片段.从各菌株中分别得到1-6条数量不等的片段,所有序列可分为两大类群.两种食用菌的少部分信息素受体基因序列聚在一起,大部分序列呈交错分布,显示出较远的亲缘关系和丰富的多态性.经翻译获得的氨基酸序列显示出更高的保守性,在最小进化树中,这些蛋白氨基酸序列可分为三大类群,茶树菇各菌株的氨基酸序列更明显地聚在一起,而且来自相近区域的菌株相似性最明显.基因邻接树和蛋白最小进化树分析都表明,真菌信息素受体基因的起源可能有两个.研究结果为真菌交配型基因研究提供了重要信息.
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云南悬钩子蔷薇NBS-LRR类抗病基因同源克隆与分析
《植物分类与资源学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为研究云南野生蔷薇属中的NBS类抗病基因,根据已知抗病基因NBS-LRR序列中的保守区域设计简并引物,利用RT-PCR技术从云南悬钩子蔷薇中进行体外扩增,获得了对应区域的cDNA片段,回收、克隆这些特异片段,测序分析,共得到4个含有NBS-LRR保守结构域的抗病基因同源序列(RGAs),分别命名为AC9、AC39、AC50和AC68。它们与已报道的11个NBS类抗病基因相应区段的氨基酸序列相似性为5.4%～79.2%,其中这4个RGAs片段与Mi、RPS2、Pib和RPM1基因聚为一类。表明这4条RGAs序列可进一步用作悬钩子蔷薇抗病候选基因的分子筛选及遗传图谱的构建。
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香石竹坏死斑点病毒的鉴定与检测
《西南农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：调查表明云南省昆明市团结乡香石竹普遍发生病毒病。电镜负染检测采自团结乡香石竹病毒病病样,病叶汁液中观察到弯曲长线型的病毒粒体,长度约1000~1600 nm,直径约12 nm。对这些病样的叶片进行间接ELISA检测,所有样品与香石竹坏死斑点病毒抗血清都呈阳性反应。按照报道的长线形病毒属简并引物合成引物,采用RT-PCR法对血清反应呈阳性的香石竹总RNA扩增了1059ntsHSP70基因部分编码序列,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行序列分析。根据测序结果设计引物建立RT-PCR扩增检测方法并测定其灵敏度。结果表明,使用简并引物和新设计的引物均能从CNFV感病香石竹组织中扩增出与预期大小一致的目标片段,而健康组织无此扩增产物。灵敏性测定结果表明该特异性引物RT-PCR可从稀释106植物总RNA中检测出病毒。
关键词： 香石竹坏死斑点病毒 RT-PCR 特异引物 简并引物
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应用特异引物和简并引物检测百合斑驳病毒
《植物检疫 》 2004
摘要：应用特异引物和简并引物对百合斑驳病毒 (LMoV)进行RT PCR检测。结果表明 ,特异引物和简并引物均能从LMoV感病百合组织中扩增出与预期大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ,简并引物还能从感染TBV的郁金香病叶中扩增出目标片段。将感染LMoV组织总RNA以 1 0倍梯度稀释成不同浓度检测 ,特异引物检测的灵敏度为 1 0 -4 ,简并引物的灵敏度为 1 0 -3 。对特异引物的PCR产物进行克隆和测序 ,序列分析表明与LMoV不同分离物的序列同源性为 90 %～ 99% ,说明采用本研究确定的方法检测百合斑驳病毒结果准确可靠。
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