科研产出
外源溶菌酶基因在水稻杂交后代中的遗传
《云南农业大学学报 》 2004 CSCD
摘要：以转溶菌酶基因水稻D2-1-1为亲本,分别与常规品种戊系28,楚粳香1号进行杂交,对外源溶菌酶基因在杂交后代的遗传方式进行了初步分析。特异的PCR分子检测表明:2个杂交组合的F1代为杂合型,均含有外源溶菌酶基因;F2代发生分离,其中携带溶菌酶基因的阳性植株与不携带溶菌酶基因的阴性植株的分离符合3∶1的分离比例,由此表明该基因在水稻中能以单位点显性方式稳定遗传,并符合孟德尔遗传分离规律。同时也证实了在转化过程中,插入到水稻基因组中的溶菌酶基因是单拷贝。
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应用特异引物和简并引物检测百合斑驳病毒
《植物检疫 》 2004
摘要：应用特异引物和简并引物对百合斑驳病毒 (LMoV)进行RT PCR检测。结果表明 ,特异引物和简并引物均能从LMoV感病百合组织中扩增出与预期大小一致的目标片段 ,而健康组织无此扩增产物 ,简并引物还能从感染TBV的郁金香病叶中扩增出目标片段。将感染LMoV组织总RNA以 1 0倍梯度稀释成不同浓度检测 ,特异引物检测的灵敏度为 1 0 -4 ,简并引物的灵敏度为 1 0 -3 。对特异引物的PCR产物进行克隆和测序 ,序列分析表明与LMoV不同分离物的序列同源性为 90 %～ 99% ,说明采用本研究确定的方法检测百合斑驳病毒结果准确可靠。
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香石竹尖孢镰刀菌PCR检测
《西南农业大学学报(自然科学版) 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：采用多重引物聚合酶链式反应(Multiplex-PCR)技术检测香石竹尖孢镰刀菌纯培养和香石竹样品,并用分离培养技术加以验证。结果表明,PCR能特异地检测出所有16个香石竹尖孢镰刀菌菌株,并证实了昆明地区的香石竹尖孢镰刀菌为2号生理小种。PCR与分离培养技术检测结果基本一致,但总体上PCR检测阳性率稍高于分离培养检测的发病率。PCR能检测出接种7d后香石竹病原菌,而观察病症需20d。该项技术具有更高的灵敏度,适用于香石竹种苗的检测和病害流行学研究。
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伞滑刃线虫属4个种rDNA的PCR扩增
《云南农业大学学报 》 2003 CSCD
摘要：从161份病松树样本中分离、鉴定出拟松材线虫(Bursaphelenchusmucronatus)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hof manni)和赫列尼库斯伞滑刃线虫(B.hellenicus)3个种,其中后二者是中国新记录种,华山松和云南松分别是这两个种的世界新寄主记录。本试验以松材线虫(B.xylophilus)为对照,用伞滑刃属线虫rDNA相关引物对这4种伞滑刃线虫进行PCR扩增,进一步印证形态鉴定的可靠性。试验结果表明,霍夫曼伞滑刃线虫、赫列尼库斯伞滑刃线虫与松材线虫、拟松材线虫,均扩增到约800bp的分子片段,为霍夫曼伞滑刃线虫和赫列尼库斯伞滑刃线虫的鉴定从分子生物学角度提供了一定依据。
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胶原Ⅳα_1链NC1结构域基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
《云南大学学报(自然科学版) 》 2002 CSCD
摘要：胶原中多个成分如ⅩⅤ ,ⅩⅤⅢ的NC结构域能抑制血管内皮细胞增殖和迁移 ,具有抑制肿瘤生长和转移的活性 .从胎盘组织中提取总RNA ,根据文献报道的胶原Ⅳα1链cDNA序列 ,设计一对特异性引物 ,应用RT -PCR方法扩增出胶原Ⅳα1链NC1结构域基因 .DNA序列测定发现 ,扩增得到的基因与文献报道序列存在单个核苷酸变异 (A132C) ,编码氨基酸 (Gly)不变 .将扩增得到的胶原Ⅳα1链NC1结构域基因克隆到原核表达载体 pPROEXHTb上 ,并在大肠杆菌BL2 1中进行体外表达
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粉虱传双生病毒的TAS-ELISA及PCR快速检测
《植物病理学报 》 2002 北大核心 CSCD
摘要：利用粉虱传双生病毒 (WTGs)多克隆抗体及单克隆抗体 ,建立了三抗体夹心 EL ISA (TAS-EL ISA)检测 WTGs的方法 ,并发现了单克隆抗体 SCR18可广泛用于我国 WTGs的检测。利用根据WTGs基因组上基因间隔区及外壳蛋白基因保守序列设计的引物 ,建立了 PCR特异检测 WTGs的方法。对田间病样的 TAS- EL ISA和 PCR检测表明 ,粉虱传双生病毒在云南省烟草、番茄和南瓜上均存在 ,2种方法的测定结果是一致的。
关键词： 粉虱传双生病毒 三抗体夹心ELISA PCR 检测
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血管生成抑制因子canstatin基因的克隆及表达
《云南大学学报(自然科学版) 》 2001 CSCD
摘要：Canstatin是最近发现的能抑制新生血管生成和肿瘤生长的又一血管生成抑制因子 .从胎盘组织中提取总RNA ,根据已知canstatin基因序列 ,设计特异引物 ,应用RT -PCR方法扩增出该基因片段 .DNA序列测定表明 ,与文献报道的该基因比较 ,核苷酸序列完全一致 .将扩增得到的该基因克隆于原核表达载体 pPROEX HTb中 ,在大肠杆菌E .coliBL2 1中经IPTG诱导获得了表达 ,表达量约占菌体总蛋白量的 2 0 %以上 .
关键词： canstatin基因 新生血管生成抑制 RT-PCR 表达
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