科研产出
非洲菊基因组DNA提取及ISSR-PCR扩增模板浓度优化
《云南植物研究 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：以改良的CTAB法为基础 ,对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化 :在第二次用氯仿 异戊醇抽提时 ,加入“PCN”溶液 (0 0 6 75gPVP ,4 5 μl 10 %CTAB +4%NaCl) ,可明显去除多糖 ;在材料研磨时加入化学物质M (0 10 0 0gNa2 SO3 ,0 0 5 0 0gVC)及N (0 0 2 0 0gVE ,0 10 0 0gNa2 B4O7,0 0 2 0 0gPVP ,2 0 0 μlβ -巯基乙醇 ) ,都可去除酚类物质 ,明显提高DNA及ISSR PCR扩增的质量 ,但N的效果稍优于M ;同时加入M、N及“PCN” ,具有明显的优化效果 ,所提 5个样品DNA ,平均A2 6 0 A2 80、A2 6 0 A2 30分别为 1 81、 2 0 2 ,浓度为 0 6 49μg μl,片段大小约为 4 9kb ,ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高 ,表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明 ,所提DNA模板必须稀释 30倍 (浓度为 15～30ng μl时 ) ,才能扩增出清晰的谱带。
全文链接
请求原文
农杆菌介导的二氢黄酮醇3’5’羟化酶cDNA对非洲菊的转化及对其花色的影响(英文)
《南京大学学报(自然科学版) 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：通过非洲菊(Gerbera hybrida)组织培养建立起适合于农杆菌介导的基因转化受体系统.非洲菊叶柄外植体在MS+3 mg/L BA+0.01 mg/L NAA培养基中直接诱导芽生长,在MS+0.1 mg/L NAA培养基中生根培养,获得再生植株,诱导率达57％.带有云南矮牵牛(Petunia hybrida)二氢黄酮醇3’5’羟 化酶cDNA的pEH表达载体与农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404融合后,与非洲菊叶柄外植体共培养3 d,通过含有卡那霉素25 mg/L和羧苄青霉素500 mg/L的选择培养,诱导出转基因非洲菊.经PCR和Southern分子杂交检测,证明目的基因已整合入非洲菊的基因组中,转基因非洲菊花色、花型及叶型都有显著变化.
关键词： 非洲菊 二氢黄酮醇3’5’羟化酶 花色 转化
全文链接
请求原文
