文献类型： 中文期刊
作者： 肖圣燕 1 ; 李镇刚 1 ; 冉瑞法 1 ; 黄平 1 ; 朱峰 1 ; 沈中元 2 ;
作者机构： 1.云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所
2.江苏科技大学
关键词： 家蚕微孢子虫;孢壁蛋白SWP25基因;Bac-to-Bac表达系统;重组质粒;转染;融合蛋白表达
期刊名称： 江苏农业学报
ISSN： 1000-4440
年卷期： 2016 年 32 卷 05 期
页码： 1023-1028
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 本研究旨在构建含家蚕微孢子虫孢壁蛋白基因SWP25的家蚕卵巢细胞(BmN)表达质粒,检测该基因在宿主细胞中的表达,为在细胞水平筛选与家蚕微孢子虫孢壁蛋白SWP25相互作用的宿主蛋白奠定基础。利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统,将家蚕微孢子虫孢壁蛋白基因SWP25和报告基因EGFP克隆到杆状病毒转移载体pFast Bac1中,转化BmDH10Bac感受态细胞并筛选阳性重组质粒用于转染BmN细胞。经PCR技术鉴定,成功获得重组杆状病毒质粒v BmEGFP-SWP25。在转染成功的细胞中可观测到绿色荧光信号。使用Western blot方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞中检测到大小约55 000的重组蛋白条带,与理论值一致,表明家蚕微孢子虫孢壁蛋白基因SWP25在BmN中成功表达。
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