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大肠杆菌植酸酶appA基因的克隆、表达及性质分析

文献类型： 中文期刊

作者： 冉瑞法 1 ; 刘淑娟 1 ; 肖圣燕 1 ; 冯蔚 1 ; 李镇刚 1 ;

作者机构： 1.云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所

关键词： 植酸酶;appA基因;大肠杆菌;克隆;表达;毕赤酵母

期刊名称： 江西农业学报

ISSN： 1001-8581

年卷期： 2017 年 29 卷 11 期

页码： 1-6+16

摘要： 通过维生素C-钼蓝法,从饲喂青饲料的猪的粪便中分离筛选出1株产较高活性appA植酸酶的大肠杆菌菌株;采用PCR方法从该菌株的基因组中克隆获得植酸酶appA基因,测序结果显示PCR产物全长1447 bp,该植酸酶基因编码区有1296个核苷酸,编码432个氨基酸。将该编码区克隆至pPIC9K载体,并转化入巴斯德毕赤酵母进行甲醇诱导表达,获得了约55 k Da的特征条带,表达96 h后其上清液的酶活力达到368 U/m L。经Ni亲和柱纯化后进行部分酶学性质分析,结果表明:重组appA植酸酶的最适反应温度为55℃,温度高于60℃后其酶活下降明显;其最适pH值为5.0。

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