科研产出
番茄斑萎病毒2个非结构蛋白VIGS体系的初步构建
《西南林业大学学报(自然科学) 》 2022 北大核心
摘要：将番茄斑萎病毒（TSWV）的NSm、NSs基因200 bp左右构建到pTRV-PTV00沉默载体上，通过农杆菌GV3101浸润本氏烟。注射10 d左右，待注射PDS基因的植株发白，将注射pTRV-PTV00-NSm、pTRV-PTV00-NSs以及pTRV-PTV00载体的植株接种TSWV，显症后采集系统叶（接种叶上一叶）应用实时荧光定量PCR检测NSm、NSs基因表达量。通过测定NSm、NSs基因表达量发现NSm基因的沉默效率为86.7%、NSs基因的沉默效率为92.00%。结果表明：通过pTRV-PTV00载体构建NSm、NSs基因沉默载体沉默效率接近90.00%，此载体适用于病毒基因沉默载体的构建，且NSm、NSs基因沉默载体能应用后续基因功能研究。
关键词： 本氏烟 番茄斑萎病毒 病毒诱导的基因沉默 非结构蛋白 实时荧光定量PCR
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番茄环纹斑点病毒非结构蛋白NSs的原核表达及多抗血清制备
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：用RT-PCR从感染番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)的番茄中扩增出编码病毒非结构蛋白NSs基因,将NSs基因构建到原核表达载体p ET-30 a中,获得原核表达载体p ET-30a-NSs,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDSPAGE电泳分析显示,高效诱导表达了57k Da融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/8192。用制备好的抗血清对TZSV感病病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清可用于TZSV的检测,并为进一步研究NSs功能奠定了基础。
关键词： 番茄环纹斑点病毒 非结构蛋白 原核表达 抗血清 检测
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番茄斑萎病毒属病毒非结构蛋白NSs的生物信息学分析
《西南农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒编码的非结构蛋白NSs,可能在病毒复制、转录、抑制RNA沉默中起重要作用,本文利用生物信息方法对21个Tospovirus病毒成员的NSs序列进行分析,为进一步研究NSs的功能提供参考信息。从GenBank数据库中下载NSs基因序列,用DNAMAN5.0做NSs相似性矩阵分析,发现一些Tospovirus病毒成员之间的NSs氨基酸序列相似性很低,最低仅为7.1%;用ClustalX2.1进行NSs的氨基酸多序列比对分析,发现Tospovirus病毒成员的NSs相对保守区主要位于NSs的C端的位置,高度保守的氨基酸位点共有9个;PROSITE对NSs进行模体预测分析,结果显示Tospovirus病毒NSs共有的蛋白修饰:C蛋白激酶磷酸化、酪蛋白激酶II磷酸化和N-酰基化。此外,不同种的Tospovirus病毒NSs模体也表现出了多样性的特点。预测结果为下一步研究NSs功能奠定了基础。
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