滇龙胆GrWRKY5基因的克隆和植物表达载体构建

王彩云; 李富生; 李涛; 李彩霞; 张晓东; 王元忠; 《广西植物 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：WRKY蛋白是目前被广泛研究的一类DNA特异结合转录因子,在植物次生代谢物生物合成、植物生长和发育及衰老等生理过程以及生物、非生物防御反应中起重要的调控作用。该研究从滇龙胆幼叶中克隆萜类合成的关键转录因子基因Gr WRKY5,并利用生物信息学方法对基因功能进行预测,构建植物过表达载体。结果表明:根据三年生滇龙胆转录组Gr WRKY5基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR扩增Gr WRKY5 ORF序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建入门载体p ENTRTM2B-Gr WRKY5,经LR反应后构建植物过表达载体。Gr WRKY5 ORF全长591 bp,编码196个氨基酸,Gen Bank登录号为KF922375,其中第167与170之间的色氨酸(W)、精氨酸(R)、赖氨酸(K)、酪氨酸(Y)组成WRKY蛋白所特有的"WRKY"结构。序列分析表明Gr WRKY5是WRKY超家族的成员。经生物信息学在线软件分析发现,Gr WRKY5的等电点为6.29,脂肪族指数为61.37,不稳定指数为57.80。总平均疏水性为-0.708,为亲水蛋白;含有20种氨基酸,其中天冬氨酸(Asp)和脯氨酸(Pro)含量最高,为8.1%;半胱氨酸(Cys)含量最低,仅为1.0%。氨基酸序列系统发育分析表明,Gr WRKY5与拟南芥中WRKY家族中遗传距离最接近的是WRKY27,属于Ⅱe类成员;与Cr WRKY22和Vv WRKY22蛋白的亲缘关系较近;与Jc WRKY47和Tc WRKY27亲缘关系较远;BLASTp结果显示,Gr WRKY5与欧洲油菜Bn WRKY27-1的同源性最高(为69%);与拟南芥Aa WRKY22的一致性最低(仅为31%)。以Gateway入门载体p ENTR2B和目的载体p K2GW7为基础,成功构建了植物过表达载体p K2-35S-Gr WRKY5,该载体的成功构建为该基因在拟南芥、滇龙胆等植物中的遗传转化奠定了基础,同时为WRKY基因功能的深入研究提供依据。

关键词： 滇龙胆 Gr WRKY5 基因克隆 序列分析 植物表达载体构建

 全文链接 请求原文

超高效液相色谱/质谱法测定血液中γ-氨基丁酸

何瑾; 屈凡伟; 张峻; 刘宏程; 《分析试验室 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：研究了超高效液相色谱-质谱检测器(UPLC-QDa)对γ-氨基丁酸的分析检测,建立了UPLC测定血液中γ-氨基丁酸的含量的分析方法。采用乙腈萃取血液样品,经BEH C18色谱柱(2.1×50 mm,1.7μm)分离,以0.1%甲酸水溶液(含0.5%乙酸胺):乙腈(95:5,V/V)为流动相,流速0.2 m L/min,质谱检测器(QDa)检测,正离子SIR模式,m/z=104进行定量,进样量1μL。对照品在0.5~10μg/m L浓度范围内与峰面积线性关系良好。3个添加试验的平均回收率分别为78.9%,87.6%,79.5%,RSD分别为1.2%,1.1%,2.1%。

关键词： 血液 γ-氨基丁酸 超高效液相色谱

 全文链接 请求原文

中水大蒜组织培养与快繁技术研究

靳松; 陈泽斌; 夏体渊; 李育川; 余燕; 任禛; 李杨; 张彩仙; 《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：以中水大蒜茎盘为材料,研究不同激素组合对组织培养的影响。结果表明,中水大蒜茎盘不定芽诱导较佳培养基为B5+1mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;愈伤组织诱导较佳培养基为B5+0.5 mg/L 2.4-D+2 mg/L NAA+1 mg/L 6-BA;高浓度的细胞分裂素有利于愈伤组织再分化,其中6-BA有利于不定芽的发生,KT有利于胚状体的发生;根诱导较佳培养基为1/2 B5+0.1 mg/L IBA。

关键词： 中水大蒜 茎盘 组织培养

 全文链接 请求原文

科技档案的现状和对策

周唯薇; 《兰台世界 》 2015 北大核心

摘要：一、目前科技档案的现状1.领导对档案管理不够重视。科学的档案管理可以充分的了解国内外的形式,了解我国的发展状况,能快速、准确、全面系统的提供科技档案,制定新的发展目标提供依据。目前,各级档案部门对科技是第一生产力认识尚不到位,忽略了科技档案对经济发展乃至整个社会的重要性,存在着领导重视不够,无分管领导,片面认为科技档案是抽象遥远的事业,更谈不上积极引导档案人员积极探索新形式下的科技档案管理,经常是一岗多

 全文链接 请求原文

浅谈信息时代档案人员应具备的素质

周唯薇; 《兰台世界 》 2015 北大核心

摘要：随着科技化、信息化、网络化的发展和应用,档案人员面临着新的挑战和选择,只有创新和提高自身的素质,转变观念,打破传统的管理模式,探索和掌握现代化的工作程序和方法,拓宽知识,不断进取,才能适应时代发展和要求。一、信息时代档案人员面临的挑战随着计算机技术和网络信息技术的不断发展,互联网被广泛地应用到社会的各个领域,也对传统的档案管理产生了强有力的冲击和挑战,对档案管理人员即是机遇更是

 全文链接 请求原文

新时期做好人事档案管理工作的几点思考

杨立新; 马艳艳; 赵敏; 《兰台世界 》 2015 北大核心

摘要：我国正处于社会主义初级阶段,全面建成小康社会进入决定性阶段,改革进入攻坚期和深水期,国际形势复杂多变,我们党面对的改革发展稳定任务之重前所未有,矛盾风险挑战之多前所未有,依法治国在全党和国家工作全局中的地位更加突出,作用更加重大。为了适应新时期的改革要求,新时期人事档案管理更显重要,开发人力资源以及高素质人才是人事档案管理部门责无旁贷的核心工作。是实现社会主义法治国家的有力保证。

 全文链接 请求原文

浅谈档案管理人员的综合素质

雷玉芬; 《兰台世界 》 2015 北大核心

摘要：众所周知,档案管理是档案馆(室)直接对档案进行实体管理和宏观管理的一项业务管理工作。随着科学技术水平的提高,档案管理这项工作所涉及的技术领域也越来越广阔,因此,档案管理人员的综合素质也显得尤为重要。接下来,我们将从以下几个方面具体谈谈档案管理人员的综合素质。一、档案管理人员应具备的综合素质1.良好的政治素质、心理行为,高尚的职业情操。具备良好的政治素质是对档案管理人员最基本的要求。作为一个高素质的档案管理人员,首先必须有正确的政治立场。在如今纷繁复杂的环境下,档案人员必须坚

 全文链接 请求原文

快速测定铁皮石斛总生物碱含量方法的优化

刘莉; 钱均祥; 萧凤回; 查应洪; 段承俐; 杨生超; 肖丹; 吴丽华; 李智敏; 《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：通过取样量、超声时间、浸提剂量、粒径等4个石斛生物碱的超声提取影响因素的正交和单因素试验。结果表明,石斛生物碱含量超声提取测定的最佳参数:0.050 g的取样量、60目的粒径、50 min的超声时间、60的浸提试剂用量与取样量比。该方法具有样品前期处理时间短,测定仪器操作简便,测定速度快、样品用量少的特点,能在较短时间内对大量单株个体进行检测鉴定,为石斛的品质育种提供了有效途径和手段。

关键词： 石斛 超声提取 总生物碱含量

 全文链接 请求原文

浅谈档案工作人员的基本素质

王芳; 《兰台世界 》 2015 北大核心

摘要：档案是指在各项工作中形成的具有保存价值的、各种形式和载体的历史记录,是科学研究、经济建设等各方面工作发展的重要凭证。档案工作所具有的政治性、科学性、服务性决定了档案事业在社会主义建设中的重要地位。档案管理工作做得好与否是衡量一个单位的成绩和管理水平的重要标准。随着当今科学技术的发展,如何才能与时俱进做好档案管理工作,提升一个单位的管理水平,这与档案工作人员的素质是分不开的。档案工作的质量高低,根本上取决于档案工作人员素质的高低,提高档案工作人员的基本素质是做好新时期档案工作的关键。

 全文链接 请求原文

基质固相分散-超高效液相色谱-质谱检测器测定牛奶中9种类固醇激素残留

刘宏程; 李宁; 林涛; 邵金良; 黎其万; 《色谱 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：利用基质固相分散技术(MSPD),建立了超高效液相色谱-质谱检测器(MSD)同时分析牛奶中9种类固醇激素残留的方法。便携式MSD的灵敏度和准确度优于紫外检测器;相比传统的质谱仪,MSD不需质谱参数优化,操作简便,开机抽真空时间短(只要5 min),即开即用。分别考察了流动相比例、萃取溶剂和固相萃取小柱净化对MSD灵敏度和牛奶样品基质效应的影响。结果表明,MSD正离子模式对吸电子基团化合物的灵敏度更高,受外界条件影响大。经MSPD净化后,9种类固醇激素的基质效应由84%~160%降低为80%~121%。方法学研究结果表明,9种类固醇激素的日内精密度和日间精密度分别为0.87%~1.78%和1.82%~3.79%,加标回收率为68.7%~94.7%,相对标准偏差(RSD)小于10%,方法检出限(LOD)为0.5~10μg/kg,定量限(LOQ)为2~20μg/kg。该方法适合日常大批量样品的检测。

关键词： 基质固相分散 超高效液相色谱 质谱检测器 类固醇激素 牛奶

 全文链接 请求原文