科研产出
猪精子发生候选基因PYGO2的分离、表达和亚细胞定位研究
《畜牧兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：旨在分离猪PYGO2编码区序列,获悉该基因mRNA组织表达模式、蛋白质结构特征、细胞中的分布和定位,并构建蛋白相互作用网络。本研究首先利用RT-PCR从成年版纳微型猪近交系（BMI）睾丸组织中克隆PYGO2编码区序列;利用生物信息学解析其基因结构并对蛋白质进行多种功能分析,比较多个哺乳动物PYGO2的氨基酸序列同源性,构建系统进化树和蛋白质相互作用网络;然后利用qPCR技术检测PYGO2在15个组织中的mRNA表达情况;最后通过构建pEGFP-C1-PYGO2融合表达载体,转染猪睾丸细胞（ST）,确定PYGO2的亚细胞定位。结果表明,PYGO2基因CDS长1 221 bp,编码406个氨基酸（基因和氨基酸号分别为KY644518和AVB77243.1）,定位在猪4号染色体;PYGO2蛋白二级结构以无规则卷曲为主,N端和C端均疏水;氨基酸序列同源比对分析表明,猪PYGO2与其他哺乳动物的相似度均大于97%,在进化上高度保守;蛋白互作网络分析显示,猪PYGO2与9个蛋白可能存在相互作用,其中与BCL9蛋白作用最为紧密;qPCR表达分析表明,猪PYGO2在被检的15个组织中均有不同程度表达,在生殖腺中表达相对较高;ST细胞中的亚细胞定位结果表明,PYGO2 mRNA主要分布在细胞核。本研究获得了PYGO2基因的编码序列,蛋白质结构和定位,蛋白质相互作用网络,mRNA多组织表达特征,可为进一步解析该基因在猪精子生成中的分子机制提供参考。
关键词： 猪 PYGO2 生物信息学分析 蛋白互作网络 表达分析 亚细胞定位
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水肥耦合对冬马铃薯产量和水分利用效率的影响
《中国土壤与肥料 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：通过田间试验,以灌水量、施氮量（N）、施钾量（K2O）为试验因素,采用三因子五水平二次通用旋转组合设计,研究了滴灌施肥条件下,不同灌水量和施肥量对马铃薯产量和水分利用效率的影响。结果表明:（1）灌水量和施氮量均对马铃薯产量和水分利用效率有极显著影响,且施氮量主效应大于灌水量,而施钾量主效应不显著;（2）单因素效应分析结果表明:马铃薯产量和水分利用效率均随灌水量和施氮量的增加呈先增加后降低的变化趋势;（3）水氮交互作用对马铃薯产量和水分利用效率均有极显著影响,合理的水氮配合可以促进马铃薯产量形成和水肥资源高效利用,较高灌水量与较高施氮量配合产量最高,中高灌水量与较高施氮量配合水分利用效率最高。在本试验条件下,马铃薯目标产量在48000～60000 kg·hm-2之间最佳水肥方案为:灌水量1569.0～1671.0 m3·hm-2、施氮量288.0～327.0 kg·hm-2、施钾量163.5～196.5 kg·hm-2,在该水肥管理下可获得较高的水分利用效率,其水分利用效率达178.88～179.03 kg·hm-2·mm-1。
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农杆菌介导遗传转化云蔗05-51
《云南农业大学学报(自然科学版) 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立云蔗05-51组培再生体系明确其对抗生素G418的耐受性,为云蔗05-51基因工程遗传改良提供参考。【方法】以云蔗05-51心叶为外植体,MS基本培养基添加2, 4-D、6-BA和KT,设置质量浓度梯度及不同激素配比,诱导愈伤组织及其分化植株。在云蔗05-51胚性愈伤组织增殖与不定芽分化阶段,培养基中添加不同含量的G418,确定合适的G418筛选质量浓度。以nptⅡ为标记基因,农杆菌介导遗传转化云蔗05-51胚性愈伤组织,筛选获得抗性植株,PCR和NPTⅡImmunoStrip检测确定nptⅡ基因的整合与表达。【结果】云蔗05-51愈伤组织诱导与增殖阶段,适宜的培养基配方为MS基本培养基添加3.0 mg/L 2, 4-D;愈伤组织分化不定芽阶段宜采用MS基本培养基添加1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT。云蔗05-51对G418耐受性筛选结果显示:愈伤组织增殖阶段和分化不定芽阶段G418的适宜筛选质量浓度分别为40和20 mg/L。G418抗性植株PCR检验表明:标记基因nptⅡ已成功整合到云蔗05-51转基因植株基因组中;NPTⅡImmunoStrip检测表明:nptⅡ的蛋白水平得以表达。【结论】建立了云蔗05-51心叶组培再生体系,明确了40和20 mg/L G418是筛选抗性愈伤和抗性植株的适宜质量浓度。建立了农杆菌介导遗传转化云蔗05-51胚性愈伤组织系统,为有益基因导入甘蔗品种提供了参考。
关键词： 甘蔗 组织培养 G418 nptⅡ PCR NPTⅡImmunoStrip
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香蕉蓟马在花蕾期发生为害动态及精准化学防控研究
《热带作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了解香蕉蓟马（Thrips hawaiiensis Morgan）的最佳防控时机,评价精准喷雾的防治效果,本研究开展了最佳诱捕效果粘虫色板的筛选,在花蕾期监测蓟马迁入动态,调查蓟马在果穗上的为害分布,评价不同施药时机的防效,以期找到最佳防控方法。结果表明:在竞争和非竞争条件下,较白色和黄色,蓝色粘虫板的诱捕效果最好;蓟马迁入动态为植株现蕾后成虫大量迁入,呈逐渐增加趋势,花蕾向地弯垂后至第8梳苞片打开期间达高峰,色板上诱捕的蓟马数量最大,达290头;果穗上所有果梳均受到为害,并随着果穗生长呈逐渐加重趋势,最末端第7果梳的为害最严重,为害症状的黑点数为207个;在植株刚现蕾和花蕾向地弯垂时,对花蕾和果穗喷雾,2次施药的间隔期为5 d,对整个果穗有较好保护作用。香蕉蓟马的最佳防治时间为刚现蕾和花蕾向地弯垂的生育期。定向精准用药能够有效防控蓟马、保护果皮外观,实现蕉园农药减量施用,为香蕉产业提质增效提供技术依据。
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钝裂银莲花花色素合成相关基因qRT-PCR内参基因的筛选
《园艺学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了筛选适合于钝裂银莲花类黄酮/花青素合成途径中相关基因q RT-PCR表达分析时的内参基因,根据钝裂银莲花蓝/白不同花色花器官组织的转录组测序结果,选取了多聚泛素酶基因（polyubiquitin,UBQ）、微管蛋白基因（β-tubulin,β-TUB）、水通道蛋白基因（aquaporin,AQP）、肌动蛋白基因（actin,ACT）、甘油醛–3–磷酸–脱氢酶基因（glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH）、组蛋白基因（histone,HIS）、转录延伸因子基因（elongation factor 1-β,EF-1β）和60S核糖体蛋白基因（60S ribosomal protein L13-1,RPL13）等8个常用内参基因作为候选基因,以钝裂银莲花的叶片、茎杆和蓝/白色花器官等不同组织为试验材料,通过qRT-PCR检测这8个候选内参基因的表达情况,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper等软件对其稳定性进行分析评价。结果表明:8个候选内参基因中,UBQ表现最稳定,而β-TUB相对稳定性最差。以最稳定的UBQ为内参对钝裂银莲花类黄酮/花青素合成途径中16个相关基因表达情况进行q RT-PCR分析,结果与前期转录组测序结果一致。UBQ为钝裂银莲花花色素合成途径相关基因表达分析的最适内参基因。
关键词： 钝裂银莲花 实时荧光定量PCR 内参基因 筛选 稳定性 类黄酮/花青素合成途径
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马铃薯资源晚疫病抗性的全基因组关联分析
《作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：广谱抗性基因的挖掘是马铃薯高抗晚疫病品种选育的基础.本研究以288份国际马铃薯中心筛选的晚疫病抗性群体为试验材料,经过连续2年田间调查,计算AUDPC和sAUDPC值,评估群体晚疫病抗性;利用SLAF-seq方法进行群体简化基因组测序,通过对晚疫病抗性表型数据的全基因组关联分析,挖掘晚疫病抗性相关的遗传位点和候选基因,为晚疫病抗性品种选育和抗病机理研究提供一定的理论和材料基础.结果表明,晚疫病抗性在288份材料间存在着广泛的遗传差异;基于5种分析模型,共鉴定到82个与晚疫病抗性显著关联的位点;在关联区间关联到54个已知或可能与晚疫病抗性相关的基因.其中,23个基因为抗性基因,包括晚疫病抗性基因R1同源基因、Sw-5同源基因(R8)和Rpi-vnt1以及编码多效性耐药蛋白基因; 5个基因编码MAPK蛋白和WRKY转录因子; 1个基因参与茉莉酸途径;3个基因与水杨酸途径相关;6个基因是病程相关的基因;3个基因参与苯基丙酸类合成途径;其他与晚疫病抗性相关的基因,如HMGR基因(2个)、细胞色素P450 (21个).
关键词： 马铃薯 晚疫病抗性 全基因组关联分析 抗性基因 国际马铃薯中心
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TSWV感染番茄叶片组织的BSE成像和精细定位
《电子显微学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：超薄切片制样透射电子显微镜观察病毒粒体在细胞中的聚集特征及其与亚细胞的相互作用是植物病毒诊断鉴定及致病性研究的基础,但存在视野小、因载网遮挡而信息不全的局限。本研究对目前蔬菜及其它重要经济作物生产上发生为害严重的番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt orthotospovirus, TSWV)侵染番茄叶片的200 nm切片,进行扫描电镜背散射电子信号观察,利用软件进行拼图,首次获得该病毒侵染番茄叶片组织的大尺度图像(～150μm×～520μm)。同时兼顾高分辨的亚细胞定位,对TSWV粒体在侵染的叶片组织中从上表皮、筛管、导管及下表皮细胞中的分布特征进行了解析,首次发现叶毛和海绵组织细胞间隙中分布TSWV粒体,并与常规超薄切片(70 nm)透射电子显微镜观察结果进行比较分析。两种方法结合可提高TSWV侵染的亚细胞病变诊断效率,对植物病毒的精准诊断鉴定和致病机理研究具有重要的参考价值。
关键词： 番茄斑萎病毒 大尺度图像 背散射电子成像 病毒粒体 分布特征
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柱状田头菇遗传转化体系启动子的筛选
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：柱状田头菇（茶树菇）Cyclocybe aegerita是一种美味的食用菌,具有很高的经济价值。构建高效表达的遗传转化体系,可以深入揭示其遗传特征及基因功能。以柱状田头菇YSG为实验材料,使用多片段重组克隆构建载体,PEG介导的原生质体转化,并以qRT-PCR为测定方法,对actin、gpd和Pumgpd不同长度5个启动子片段驱动靶标基因的表达量进行分析。依据actin基因启动子构建的载体pAa-actin-1和pAa-actin-2获得转化子中,靶标基因表达量为对照3倍以上转化子数量分别为50%和33.33%,最高表达量分别为对照的10.45和6.23倍;携带pAa-gpd-1、pAa-gpd-2和pAa-Pumgpd启动子的载体获得的转化子中,表达量为对照3倍以上的数量分别为0、28.57%和25%,最高表达量分别为对照的2.93、7.75和4.31倍。actin启动子获得高表达转化子得率较gpd和Pumgpd启动子片段高,适用于柱状田头菇转化体系构建。
关键词： 柱状田头菇 启动子筛选 遗传转化 载体构建 过量表达
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植物种和氮添加对元谋干热河谷草地土壤有机碳分解的影响
《应用与环境生物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了解植物生长和氮（N）添加对元谋干热河谷区草地土壤活性炭组分和惰性碳组分分解的影响,在元谋干热河谷典型燥红土上开展植物物种和氮添加实验,分析不同物种[扭黄茅Heteropogon contortus)、橘草（Cymbopogon goeringii）、孔颖草（Bothriochloa pertusa）、拟金茅（Eulaliopsis binata）]和氮（N）添加对干热河谷区草地土壤有机碳分解的影响.结果表明:（1）相较于裸地,植物着生后土壤全碳（TC）、全氮（TN）含量以及土壤C:N增加;土壤微生物含量增加,土壤活性炭组分和惰性碳组分分解速率显著升高.（2）N添加后土壤中微生物呼吸速率、微生物代谢熵以及惰性碳组分分解速率均不同程度降低.（3）双因素方差分析表明,N添加和不同植物种对碳分解均有显著影响,但两者交互作用对碳分解速率的影响不显著.总之,在元谋干热河谷植物生长能够显著改善土壤理化性质,促进土壤有机碳的分解,而氮添加对土壤惰性碳组分的分解有抑制作用;上述研究结果可为认识植被恢复和氮沉降背景下干热河谷土壤碳循环提供一定理论基础,同时为干热河谷土壤生态系统功能恢复和调控提供科学依据.（图4表2参47）
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云南芝麻丛枝和花变叶植原体16S rRNA和rp基因序列分析
《植物病理学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：本研究通过对表现出丛枝和花变叶症状的芝麻感病植株总DNA进行植原体16S rRNA和rp基因的PCR扩增、克隆、测序及序列分析,明确了两种病株的病原均为植原体,并将其命名为云南元谋芝麻丛枝植原体（SEWB-YNym）和云南元谋芝麻花变叶植原体（SEP-YNym）。两个株系的16S rRNA基因片段长度均为1 248 bp,并且碱基序列完全一致。通过与其他地区报道的芝麻植原体株系16S rRNA基因序列比对后发现这两个株系与来自缅甸的株系不存在位点差异,而与泰国、中国台湾、印度的株系分别存在3～6个位点差异。同时,还从两个株系中获得了长度均为1 171 bp并且碱基序列也完全一致的SEWB-YNym和SEP-YNym的rp基因序列。此rp基因序列包括全部rpl22基因（nt90-476）和部分rps3基因（nt550-1170）,分别编码128和206个氨基酸。通过对16S rRNA和rp基因的序列进行同源性比对、构建系统进化树等分析,表明两个株系与候选种‘Candidatus Phytoplasma aurantifolia’相关,为16SrII-A亚组成员,并归属于植原体rp-iii亚进化支。
关键词： 芝麻 丛枝 花变叶 植原体 16S rRNA基因 rp基因
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