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月季抗白粉病基因RhMLO的亚细胞定位及功能分析
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：MLO是一类新发现的抗病基因,一些双子叶植物隐性突变的mlo基因使其获得了广谱高抗的抗病性。通过生物信息学分析结合亚细胞定位试验,对前期克隆获得的月季MLO进行亚细胞定位,结果表明,RhMLO1和RhMLO2均为主要分布于细胞质膜、液泡膜和细胞核的跨膜蛋白,与预测结果相符。构建了RhMLO1的正义表达载体,通过农杆菌介导法对月季‘白玉’植株体细胞胚进行遗传转化。利用PCR法和荧光定量PCR法对转基因植株进行分子检测,表明基因已经整合到转基因植株中。分别利用离体鉴定法和显微镜观察法对转基因植株和对照植株进行对白粉病菌(Podosphera pannosa)抗性鉴定,结果一致显示:正义载体的导入降低了转基因植株对白粉病的抗性。
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二倍体月季F_1群体的SSR鉴定与遗传分析
《园艺学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：以中国古老月季品种‘月月粉’(Rosa chinensis‘Old Blush’,用OB表示)为母本,‘无刺光叶蔷薇’(Rosa wichuriana‘Basye’s Thornless’,用W表示)为父本,构建F_1代共296个单株。从146对SSR标记中筛选出亲本间多态性好且条带清晰的23对SSR标记,对随机选择的94株F_1进行杂种鉴定和遗传分析。结果表明:筛选到3个纯合显性标记分别为Fv512、Fv609和305,可单独一次性鉴定全部杂种真实性;随机筛选的94株子代均为真杂种;20个SSR标记用于基因型分析,有9个标记出现了偏分离,并在统计上达到显著或极显著水平,偏分离率45%,说明该F_1群体基于SSR位点的基因型偏分离率较高,在进行高密度遗传图谱构建时应重视偏分离标记对作图的影响;UPGMA聚类分析显示,94株F_1的遗传变异大,且遗传多样性丰富,可划分为2个大类7个亚类。
关键词： 月季 二倍体 F_1群体 杂种鉴定 SSR标记 偏分离
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基于草莓基因组序列高通量开发月季SSR标记
《西南农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：研究根据草莓基因组和月季基因组的同线性关系,高通量开发月季SSR共显性标记。利用MISA软件对总长206.8Mb的草莓基因组序列进行扫描,共识别49 029个SSR位点,平均每4.2 kb包含1个SSR位点。利用primer3软件成功对21 288个SSR位点设计引物。利用中国古老月季品种‘月月粉’(Rosa chinensis‘Old blush’)和园艺品种‘无刺光叶蔷薇’(Rosa wichuriana‘Basye’s thornless’),随机选取300对SSR引物进行PCR扩增,40对引物获得清晰条带,扩增率为13.3%,发现其中8个可转移的SSR位点位于草莓基因组第六染色体63 959 bp的基因组区间。研究结果为月季和草莓间的比较基因组学研究提供了分子证据,为月季生物学研究提供宝贵的标记资源。
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‘月月粉’连续开花习性遗传规律分析
《园艺学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：连续开花(Perpetual blooming,PB)是观赏植物的重要性状之一,是中国月季对现代月季的重大贡献。然而月季连续开花性状的遗传基础至今尚未清晰。为研究中国古老月季品种‘月月粉'(Rosa chinensis‘Old Blush',用OB表示)连续开花习性的遗传规律,以其为母本,以一季开花(Single seasonal blooming,SB)园艺品种‘无刺光叶蔷薇'(Rosa wichuriana'Basye's Thornless',用W表示)为父本,构建了OB、W、F_1、F_2、BC_1OB和BC_1W等6个世代827个株系的二倍体遗传分离群体。遗传分离群体表型测定将开花表型分为连续开花和非连续开花(Non-perpetual blooming)2种类型。296株F_1和150株BC_1W群体均表现为非连续开花,表明OB连续开花性状受隐性基因位点调控。300株BC_1OB群体中83株为连续开花,223株为非连续开花,χ~2适合性测验符合1:3的遗传分离规律(P<0.05),表现为双隐性基因遗传,表明‘月月粉'连续开花可能受双隐性基因位点共同调控。
关键词： 月季 中国月季 连续开花 遗传分离群体 双隐性位点
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蔷薇属3个野生种中45S rDNA和5S rDNA的物理定位
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用双色荧光原位杂交(FISH)技术对3个二倍体蔷薇野生种:多苞蔷薇(Rosa multibracteata Helm.et Wils.)、川滇蔷薇(R.soulieana Crép.)和金樱子(R.laevigata Michx.)的体细胞中期染色体进行了45S rDNA和5S rDNA物理定位。结果表明:45S rDNA在这3种蔷薇的染色体上的数量和分布模式较一致,都有1对位点,均位于一对亚中部着丝点异形同源染色体的短臂上。5S rDNA在多苞蔷薇上有1对位点,在川滇蔷薇和金樱子上各有2对位点,都分布于染色体长臂的近着丝点处。这3种蔷薇各自的rDNA位点数量、所在染色体和信号强弱有明显差异。研究结果为识别3种蔷薇各自的染色体提供了明确有效的分子细胞遗传学标记。
关键词： 蔷薇属 rDNA 荧光原位杂交(FISH) 核型
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45S rDNA在中国古老月季品种染色体上的荧光原位杂交分析
《云南农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用荧光原位杂交(FISH)技术研究45S rDNA在10个中国古老月季品种染色体上的差异.结果表明:(1)中国古老月季品种的45S rDNA杂交位点数与染色体倍性变化基本一致,中国古老月季的起源可能比较简单:二倍体的‘月月红’、‘月月粉’和‘绿萼’均有2个45S rDNA杂交位点,三倍体的‘湖中月’、‘青莲学士’和‘春水绿波’有3个45S rDNA杂交位点,四倍体品种除‘大富贵’有3个杂交位点外其他都有4个45S rDNA杂交位点;(2)中国古老月季品种之间在45S rDNA杂交信号的强弱上存在差异,说明中国古老月季品种之间在染色体结构及45S rDNA拷贝数上存在多样性.
关键词： 蔷薇属 荧光原位杂文(FISH) 45S rDNA 中国古老月季
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月季“月月红”(Rosa chinensis‘Slater’s crimson China’)愈伤组织诱导及植株再生初报
《西南农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以"月月红"(R.chinensis‘Slater’s crimson China’)的嫩叶为外植体,采用MS为基本培养基,在添加不同浓度的2,4-D、TDZ、GA3和NAA上,结合不同时间的暗培养,研究"月月红"胚性愈伤组织的诱导及植株再生。结果表明,2,4-D 5 mg/L暗培养20 d诱导出的愈伤组织,在MS+TDZ 1.0 mg/L+GA30.1 mg/L+NAA0.01 mg/L培养基上暗培养12 d,可以获得较好的胚性愈伤组织;胚性愈伤组织转入光照培养15 d后可形成肉眼可辨的子叶期体胚及具有不定芽和胚根的结构,20 d后可长成绿色的小植株。
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月季(Rosa chinensis)丁香酚合成酶基因RcEGS1的克隆及其表达分析
《园艺学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank发表的丁香酚合成酶(EGS)基因的蛋白保守序列设计引物,利用RT-PCR结合RACE-PCR技术,从古老月季(Rosa chinensis)品种‘月月粉’盛开期的花瓣中获得了1个新的丁香酚合成酶基因RcEGS1,GenBank登录号为JQ522949。该基因全长为1171bp,开放阅读框(ORF)951bp,编码317个氨基酸;蛋白质理论分子量为35.64kD,等电点为7.36。氨基酸同源性分析表明,RcEGS1与矮牵牛PhIGS1的氨基酸同源性达到70%,与罗勒ObEGS1的同源性为59%,与月季RhEGS1的同源性仅为48.2%。运用实时荧光定量PCR法分析RcEGS1在不同组织部位和不同开放时期花瓣中的表达,发现其在叶片和茎段中没有表达,在花瓣和萼片中有表达,在盛开期的花瓣中表达量最高。
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云南悬钩子蔷薇NBS-LRR类抗病基因同源克隆与分析
《植物分类与资源学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为研究云南野生蔷薇属中的NBS类抗病基因,根据已知抗病基因NBS-LRR序列中的保守区域设计简并引物,利用RT-PCR技术从云南悬钩子蔷薇中进行体外扩增,获得了对应区域的cDNA片段,回收、克隆这些特异片段,测序分析,共得到4个含有NBS-LRR保守结构域的抗病基因同源序列(RGAs),分别命名为AC9、AC39、AC50和AC68。它们与已报道的11个NBS类抗病基因相应区段的氨基酸序列相似性为5.4%～79.2%,其中这4个RGAs片段与Mi、RPS2、Pib和RPM1基因聚为一类。表明这4条RGAs序列可进一步用作悬钩子蔷薇抗病候选基因的分子筛选及遗传图谱的构建。
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月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的克隆及表达分析
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的全长cDNA序列,分析其序列及表达特征,并对该基因编码的蛋白进行原核表达分析,为深入探讨丁香酚合成酶的生化特性奠定基础。【方法】根据已发表的其它植物EGS基因序列的保守结构域设计简并引物,结合RACE技术,获得RhEGS1的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;利用半定量RT-PCR对不同组织及不同花发育时期RhEGS1进行表达分析。采用Gateway克隆技术,构建原核表达载体,并进行原核蛋白表达。【结果】月季RhEGS1的cDNA全长为1 207 bp,包含一个927 bp的ORF,编码309个氨基酸。同源序列比对发现RhEGS1与仙女扇的CbEGS2有83.87%的同源性,与矮牵牛PhEGS1具有81.55%同源性。表达谱分析表明,RhEGS1主要在雄蕊中表达,且在花盛开期表达最强,而在花蕾期及凋谢期表达较弱。原核表达分析发现,在37℃、0.5 mmol.L-1IPTG诱导4 h后,携带RhEGS1 ORF的原核表达载体在大肠杆菌中生成了大量的分子量约为35 kD的蛋白质,其分子量大小与预测的理论值相一致。【结论】从月季雄蕊中克隆到丁香酚合成酶基因RhEGS1,具有EGS基因的结构特征和完整的编码框,且在盛开期雄蕊中表达量最高。
关键词： 月季 丁香酚合成酶基因 RT-PCR Gateway克隆 原核表达
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