科研产出
TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒
《植物保护 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法.该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10-3fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10-2 fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2 分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好.利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了 53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV).综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑.
关键词： 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 TaqMan探针 RT-qPCR 兰花
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6个抗稻瘟病基因在云南省勐海县水稻主栽品种中的分布
《中国农学通报 》 2024 CSCD
摘要：为了明确勐海县水稻主栽品种中已克隆的Pi2、Pi9、Piz-t、Pi50/Pigm、Pita-2和Pib等6抗稻瘟病基因的构成。通过对勐海县18个水稻主栽品种为试验材料，利用6个抗病基因的特异分子标记进行抗瘟基因的分子检测。结果显示：抗性基因Pib分布频率最高，检出率为77.78%,Pi2、Pita-2和Piz-t的检出率分别为22.22%、22.22%和11.11%；在供试品种中未检测出抗性基因Pi9和Pi50/Pigm基因。检测到2个抗性基因和1个抗性基因的品种均为8份（均占44.44%），未检测出抗性基因的品种为2份（占11.11%）。结果表明：勐海县水稻主栽品种的抗性遗传背景较为狭窄，需引入新的有效抗源以拓宽水稻品种的抗病性。
关键词： 水稻稻瘟病 抗性基因 分子标记 勐海县 分子检测 遗传背景
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油菜基质块移栽机苗床带整备装置设计与试验
《华中农业大学学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：针对现有油菜基质块苗移栽机开沟装置作业存在沟宽稳定性差、沟底面平整度低、土壤扰动大等现象,导致立苗率低、覆土作业难度大等问题,基于船式开沟器腔体大以及芯铧式开沟器作业构建宽苗床、平沟底特点,结合类铧式曲面衔接过度,设计了一种适用于油菜基质块苗移栽机苗床构建的苗床带整备装置.建立了土壤与整备装置互作力学模型,确定了苗床带整备装置构建稳定苗床的主要结构参数.以整备装置作业速度、作业深度、类铧式曲面前端宽度、刃口角为因素,以土壤扰动量、沟宽变异系数为评价指标,利用EDEM开展四因素三水平二次正交组合仿真试验,试验结果显示:作业深度为41 mm、作业速度为0.52 m/s、类铧式曲面前端宽度为40 mm、刃口角为61o时土壤扰动量较小且沟宽变异系数较小;较优参数组合下台架试验得出土壤扰动量为13.01 cm2,沟宽变异系数8.52%.田间试验结果显示:安装在移栽单元上的苗床带整备装置相较船式开沟器的载苗基质块立苗率增加2.09百分点,沟宽变异系数减少13.3%,土壤扰动量减少20.9%,沟底面紧实度增加28.7%,满足油菜基质块苗机械移栽苗床构建要求.
关键词： 油菜 移栽机 苗床带整备装置 类铧式曲面 机械移栽
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两个柠檬品种叶片离区响应乙烯利处理的转录组分析
《植物遗传资源学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：艾伦尤力克是尤力克柠檬的一个芽变品种,结果性状优良,但冬季落叶严重,影响翌年产量,且其落叶的响应机制目前尚不清楚.为探究柠檬叶片脱落的分子调控机制,以2个冬季落叶程度不同的柠檬品种艾伦尤力克和云柠1号为材料,分别于落叶前期(E24)、落叶中期(E48)和落叶后期(E72)采集叶柄离区,通过转录组测序比较2个品种间的差异表达基因.分析表明,落叶前期、落叶中期和落叶后期分别获得1400个、2466个和935个差异表达基因,其中落叶中期的差异基因数量最多.GO分析表明血红素结合、四吡咯结合、氧化还原酶活性、铁离子结合、转录调节活性以及对氧化应激的反应、细胞葡聚糖代谢过程、葡聚糖代谢过程、细胞外围、细胞壁等相关基因在这3个时期品种间均表现出显著差异.KEGG分析表明,落叶中期富集的差异基因数及相关代谢途径最多,主要集中在植物激素信号转导、苯丙烷生物合成、植物病原体相互作用和MAPK信号通路-植物等途径,通过对以上4个途径的差异表达显著的基因进行分析,最后筛选得到木葡聚糖内转葡糖基酶/水解酶蛋白、吲哚乙酸诱导蛋白、吲哚-3-乙酸-氨基合成酶、过氧化物酶、β-葡萄糖苷酶、发病相关基因转录激活因子AP2和发病机制相关蛋白等13个基因,这些基因可能与柠檬叶片脱落的调控有关.qRT-PCR验证这些基因的表达与转录组数据相一致.以上结论丰富了柠檬叶片脱落相关研究,为柠檬落叶候选基因筛选、落叶途径解析提供可靠数据.
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云南白菜根肿病拮抗菌的筛选及鉴定
《西南农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]获得对云南白菜根肿病具有高效拮抗作用的微生物菌株,为云南白菜根肿病的生物防治提供潜在的菌种资源.[方法]从云南省曲靖市麒麟区三宝乡大棚白菜根肿病发病严重的地块,采集正常生长或发病较轻的白菜植株及其根际土壤,分离筛选抑菌效果较好的菌株,并对其进行形态特征鉴定、生理生化检测及分子序列分析.[结果]经初步筛选共获得46株细菌.土壤样品中共分离出30株细菌,其中抑制效果最好的是TB-7菌株,该菌株对白菜根肿病菌休眠孢子萌发抑制率为76.88%;白菜植株内共分离出16株内生细菌,其中抑制效果最好的是EB-15菌株,该菌株对白菜根肿病菌休眠孢子萌发抑制率为67.38%.通过对比分析选择抑菌效果最好的TB-7菌株作为目标菌株,经鉴定,TB-7菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌,菌体菌落较小,颜色淡黄色,表面光滑且扁平,菌体湿润,不透明,边缘规则;生理生化指标检测结果显示,TB-7菌株是好氧菌,V-P、淀粉水解、pH 5.7,生长3项检测指标均呈阳性,柠檬酸盐、丙酸盐、D-木糖、L-阿拉伯糖、D-甘露醇、明胶液化、7%NaCl生长、硝酸盐还原8项检测指标均呈阴性;16S rDNA扩增产物约为1500 bp,测序结果表明,TB-7菌株与坚强芽孢杆菌(Cytobacillus firmus)同源性达到100%,鉴定该菌株为芽孢杆菌属的坚强芽孢杆菌.[结论]通过初步筛选及鉴定,获得1株对白菜根肿病菌休眠孢子抑制率达到76.88%的拮抗菌株,该菌株的获得可为解决云南本地日益严重的白菜根肿病的生物防治奠定基础.
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云南瑞丽4个主栽柑橘品种成熟期果实品质变化规律
《广东农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探究云南瑞丽地区主栽柑橘品种成熟期果实品质变化规律，为确定果实适时采收期提供理论依据。【方法】以云南主栽的4个柑橘品种（沃柑、冰糖橙、茂谷柑、W·默科特）为试材，分别从花后150～330 d（2020年8月12日—2021年2月8日）和花后240～405 d（2021年11月8日—2022年4月28日）开始采果，每隔15 d定期采样并测定果实品质。【结果】随着柑橘果实的成熟，4个品种果实单果质量及横、纵径呈先上升后平缓的趋势，沃柑在花后270 d前、冰糖橙在花后255 d前、茂谷柑在花后300 d前、W·默科特在花后285 d前其果实结束快速生长膨大期；2年内，除茂谷柑转色期一致外，W·默科特果皮转色期早于第1年，沃柑和冰糖橙转色期晚于第1年。冰糖橙、沃柑、茂谷柑和W·默科特的可溶性固形物（TSS）质量分数分别在其花后240、315、300、270 d后基本稳定，可滴定酸（TA）质量分数分别在花后180、210、240、240 d后无显著变化。【结论】综合考虑单果质量、横纵径、果皮颜色和内含物质量分数等指标，沃柑在花后315 d、冰糖橙在花后255 d、茂谷柑在花后300 d、W·默科特在花后285 d时果实达到采收成熟度，适宜开始采收。
关键词： 柑橘 发育成熟期 外在品质 内在品质 品质变化 采收期
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紫花苜蓿种植模式对干热河谷咖啡园土壤质量的影响
《农业环境科学学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为改善干热河谷地区咖啡园脆弱的生态环境，探讨不同的覆盖作物种植模式对咖啡园土壤质量的影响，本研究通过设置紫花苜蓿单播（A1），紫花苜蓿×光叶紫花苕混播（A2）两个处理，以休闲处理（CK）为对照，分析了覆盖作物盛花期时对土壤酶活、理化性质、细菌群落结构和多样性的影响。结果表明：A1、A2处理都能显著提高咖啡园土壤有机质和氮素含量（P<0.05），促进土壤pH从弱碱性恢复到中性，更利于咖啡树的生长；与CK相比，A1的土壤脲酶显著提高（P<0.05）,A1、A2、CK的土壤过氧化氢酶活性无显著差异（P>0.05）;A1的Sobs指数、Chao1指数显著低于A2、CK处理（P<0.05）,A1、A2的Shannon指数显著低于CK(P<0.05)，与休闲处理相比，单播/混播覆盖作物种植降低了土壤细菌多样性，但紫花苜蓿×光叶紫花苕混播的土壤细菌多样性比紫花苜蓿单播更丰富；酸杆菌门是A1的优势菌门，放线菌门是A2、CK组的优势菌门，酸杆菌门的RB41是3个处理的优势菌属；pH值对土壤细菌种群分布的影响最大；细菌群落的主要功能是碳水化合物代谢和氨基酸代谢。覆盖作物种植可以显著增加干热河谷地区咖啡园土壤营养，调整土壤酸碱度，影响土壤细菌群落结构和功能，土壤改良效果显著，紫花苜蓿和光叶紫花苕混播是干热河谷地区咖啡园覆盖作物种植的较优模式。
关键词： 豆科覆盖作物 干热河谷 种植模式 咖啡园 土壤质量
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大理野茄M239响应黄萎病病菌侵染的差异表达蛋白分析
《华北农学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了探索植物响应黄萎病病原菌侵染的作用机制,以黄萎病高感野茄材料大理野茄(M239)为研究对象,通过人工接种黄萎病病原菌大丽轮枝菌的方法,首先测定M239在接种大丽轮枝菌后0,6,12,24,48 h的根部4个关键生理指标,即过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性和可溶性蛋白(SP)含量的变化.结果确定接种大丽轮枝菌后12,24 h为蛋白组分析取样的关键时间点;在此基础上,利用iTRAQ技术分析M239在接种大丽轮枝菌后根部蛋白的变化.结果发现,与清水接种(CK)相比,M239接种大丽轮枝菌后12 h有463个差异表达蛋白(DEPs),其中305个下调,158个上调;接种后24 h,有456个DEPs被病原菌诱导表达,包括296个下调,160个上调.这些蛋白主要富集在碳代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、次生代谢物的生物合成、丙酮酸代谢、新陈代谢等途径.通过与已报道的黄萎病抗性材料的研究结果进行对比分析发现,M239在响应大丽轮枝菌的侵染过程中,参与防御响应的蛋白数量和代谢通路较少,未能形成有效的防御网络,最终表现为感病.
关键词： 野茄 黄萎病 大丽轮枝菌 iTRAQ技术 差异表达蛋白
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胶体金免疫层析法快速检测蔬菜中3种农药残留
《河南农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：基于胶体金免疫层析原理研制吡虫啉、丙溴磷及克百威快速检测试纸条，评价其在大蒜、白菜检测中的应用效果。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用胶体金颗粒标记吡虫啉、丙溴磷及克百威单克隆抗体作为检测探针，以硝酸纤维素膜为固相载体，包被吡虫啉-BSA、丙溴磷-BSA及克百威-BSA偶联物为检测线，羊抗鼠IgG抗体为质控线，制备胶体金免疫层析试纸条，并对金标抗体用量、标记抗体浓度、检测线包被浓度等参数条件进行优化，评价试纸条的灵敏度、特异性、稳定性和准确性。以大蒜、白菜为对象，优化了样品前处理方法，并对这2种蔬菜样品进行阴性检测及添加标准品农药检测。结果表明，优化后的工艺参数中吡虫啉、丙溴磷、克百威的最适标记抗体质量浓度分别为9.6、8.4、9.6μg/mL，抗原的包被质量浓度均是0.3 mg/mL，检测用时约15 min。吡虫啉、丙溴磷及克百威的检出限分别为20、3 000、20 ng/mL，符合国标对2种蔬菜的限量规定。检测与吡虫啉、丙溴磷及克百威功能和结构相似的其他药物时无交叉反应，特异性较好。克百威和吡虫啉农药的最适提取剂分别为4 mL乙酸乙酯和4 mL甲醇，样品用量均为2 g，上清液3 mL；丙溴磷农药的最适提取剂是9 mL乙酸乙酯，样品用量3 g，上清液8 mL，上清液用氮气吹干。50份蔬菜阴性样品和加标样品的检测结果显示，假阳性率为6%，假阴性率为0。可见，研制的试纸条适用于大蒜、白菜现场快速检测以及基层实验室中大量样本的筛查，可为大蒜、白菜中农药残留控制提供有效监管手段。
关键词： 大蒜 白菜 胶体金快速检测 吡虫啉 丙溴磷 克百威
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