科研产出
马来西亚链霉菌ECO 00002产Azalomycin F发酵条件优化
《西南农业学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过优化马来西亚链霉菌ECO 00002菌株的发酵培养基和发酵条件,以提高阿扎霉素F产量,为其产业化开发奠定基础。【方法】在摇瓶水平上,采用Plackett-Burman(PB)试验考察葡萄糖、淀粉、酵母膏、大豆粉、氯化钠、磷酸氢二钾等6个因素对阿扎霉素F HPLC效价的影响,并通过Response-Surface-Analysis(RSA)试验确定各因素最大响应值;进一步通过梯度试验,筛选适宜的初始pH、发酵瓶装液量、接种量、发酵温度、发酵时间等发酵条件;最后利用优化的发酵条件在50 L全自动发酵罐中进行放大应用试验,验证优化条件。【结果】发酵培养基中主要的影响因素为大豆粉和葡萄糖,其最大响应值分别为2.90%和1.59%;优化发酵条件为初始pH 7.5,装液量100 mL/500 mL,接种量为10%,发酵温度28℃,发酵时间72 h。【结论】在优化的发酵培养基和发酵条件下,摇瓶水平上阿扎霉素F HPLC效价由原来的637.59μg/mL上升到1950.26μg/mL,HPLC效价提高率为205.88%(P<0.01);50 L发酵罐阿扎霉素F的HPLC效价为2094.12μg/mL,优化效果显著。
关键词： 阿扎霉素F 碳氮源 PB试验 RSA试验 发酵条件 优化
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割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化
《南方农业学报 》 2013 CSCD
摘要：【目的】建立和优化割手密AFLP分子标记技术体系,为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持。【方法】以广西割手密GXS87-16、GXS85-30、GXS79-9、GXS96、GXS112、GXS212为材料,利用改良SDS法提取DNA,并用EcoRⅠ和MseⅠ酶切,连接接头后,采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如Mg2+、模板DNA、引物、dNTP、Taq聚合酶浓度进行优化。【结果】样品DNA用限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ各3U于PCR仪过夜可完全酶切。经正交设计优化,较佳的预扩增体系包含0.4μLdNTPs(20mmol/mL),1.6μLMg2+(25mmol/mL),2.0μLEcoRⅠ-P(5pmol/mL),2.0μLMseⅠ-P(5pmol/mL),1UTaq酶(1U/μL),DNA模板稀释10倍;选择性扩增体系包含0.4μLdNTPs(20mmol/mL),0.8μLMg2+(25mmol/mL),1.0μLEcoRⅠ-AAG(6pmol/mL),1.0μLMseⅠ-CAG(6pmol/mL),3UTaq酶(1U/μL),DNA模板稀释20倍。以对优化反应体系扩增获得的PCR产物用5%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,可获得清晰的多态性指纹图谱。【结论】建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清晰、多态性丰富的特点,可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持。
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百合ISSR-PCR反应体系的优化
《江苏农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为优化百合ISSR-PCR反应体系,利用正交试验设计,对百合ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素进行优化筛选。结果表明:优化的25μL百合ISSR-PCR反应体系为dNTP 0.2 mmol/L、Mg2+2.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 60 ng和Taq酶1.0 U,最佳退火温度为52.2℃。该体系以38个品种(种)百合进行扩增验证,得到的条带清晰、多态性高,且具有良好重复性。说明优化的百合ISSR-PCR反应体系适用于百合资源的品种(种)鉴定及遗传多样性研究。
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利用正交设计优化甘蔗SRAP-PCR反应体系
《中国糖料 》 2011
摘要：利用正交设计L16(45)对甘蔗SRAP-PCR反应体系的五大因素(Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA、Taq酶)在4个水平上进行优化,得到如下结论:各因素水平变化对PCR反应的影响从大到小依次是:Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和模板DNA;通过对各因素进行筛选,建立甘蔗SRAP-PCR反应的最佳体系(20μL)为:dNTPs 0.25 mmol/L、引物0.1μmol/L、Mg2+2.5 mmol/L、Taq酶0.25U和模板DNA 60 ng。
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月季ITS反应体系的优化
《华中农业大学学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以古老月季品种‘玉玲珑’为试材,利用CTAB法对月季进行总DNA提取,对其PCR扩增条件中的主要因素进行了多梯度的优化,总反应体系为25μL,其中引物浓度为0.4μmol/L、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、dNTP为0.2 mmol/L、Taq酶用量为1.0 U、DNA模板用量为70 ng。利用该优化体系对部分月季品种和野生种进行PCR扩增和电泳检测,扩增条带清晰,结果稳定,测序结果理想,表明该体系适用于月季的ITS序列分析。
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月季SSR反应体系的优化
《西南大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以月季品种‘月月粉’为试材,利用CTAB法提取DNA,对影响SSR-PCR扩增体系的主要因子设计了多梯度的优化实验,建立了适用于月季的SSR反应体系:总反应体积为25μL,包括模板DNA溶液(20 ng/μL)2μL,10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0μL,dNTPs(10 mM)0.5μL,正反引物各(10μmol/L)1μL,TaqDNA聚合酶(5 U/μL)0.3μL.利用该优化体系对部分月季品种进行PCR扩增和电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合用于分析月季的遗传多样性.
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大蒜RAPD反应体系的建立及优化
《西南农业学报 》 2006 CSCD
摘要：该试验以弥渡紫皮大蒜叶片基因组DNA为试材,采用不同浓度MGCL2、引物、DNTP、TAPDNA聚合酶对大蒜的RAPD体系进行单因素反应条件优化.结果表明,25μL总反应体积中,最佳浓度配比为:模板DNA 40NG,MGCL2 2.0 MMOL/L,引物12 PMOL,DNTP 50μMOL/L,TAQ DNA聚合酶1 UNIT,10*反应缓冲液2.5μL.扩增程序为:94℃变性3 MIN,94℃变性30 S,37℃退火30 S,72℃延伸1 MIN,共35个循环,72℃最终延伸10 MIN.
关键词： 大蒜 基因组DNA 随机扩增多态性DNA 反应体系 优化
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