科研产出
甘蔗梢腐病致病菌甘蔗镰刀菌的分离及鉴定
《中国农学通报 》 2025 CSCD
摘要：甘蔗梢腐病是由多种镰刀菌引起的真菌性病害。为明确云南甘蔗梢腐病病原种类，从云南开远和孟连采集甘蔗梢腐病样品33份，分离纯化得到菌株FS1和FS2，提取其DNA；利用转录延长因子基因(EF-1α)、微管蛋白基因(TUB2)、聚合酶基因(RPB2)引物序列对分离到菌株进行PCR扩增，获得了与目的条带大小一致的清晰明亮条带；将产物测序后在NCBI网站上进行BLAST比对分析，菌株FS1和FS2的EF-1α序列、TUB2序列和RPB2序列与Fusarium sacchari的EF-1α（登录号MK609907.1）、TUB2（登录号MT011039.1）和RPB2（登录号MW238849.1）序列的相似性和覆盖性均为100%；同时通过MEGA6.0软件以最大似然法建立菌株FS1和FS2的系统发育树，发现FS1、FS2与F. sacchari均聚在同一分支上；因此，根据菌株FS1和FS2的形态学特征以及分子生物学鉴定结果，甘蔗梢腐病的病原菌鉴定为F.sacchari。用F. sacchari孢子接种‘云蔗08-1609’，接种7 d叶片出现退绿和叶片黄化症状；将接种发病叶片进行再次分离和测序，分离到菌株EF-1α序列与F. sacchari的EF-1α（登录号MK609907.1）序列的相似性和覆盖性均为100%。研究表明，F. sacchari为开远和孟连引起梢腐病的致病菌。
关键词： 甘蔗 梢腐病 镰刀菌 分离 鉴定 PCR扩增 系统发育分析
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流式细胞仪对甘蓝花粉倍性的测定
《湖北农业科学 》 2024 北大核心
摘要：利用流式细胞仪测定甘蓝（Brassica oleracea var. capitata）花粉的倍性，以甘蓝GL21028的花粉为材料，以叶片为对照，比较花粉2种处理方式、3种不同细胞裂解液、2种核酸染料的效果差异。通过B缓冲液处理后获取的花粉细胞可以直接染色，为最简便处理方式；采用“Aru”buffer和Y 2种裂解液，染色剂DAPI，处理甘蓝叶片和花粉，通过流式细胞仪检测，样本细胞DNA成峰集中，细胞碎片很少；配制的Y裂解液能够适用甘蓝材料流式细胞仪的观察。甘蓝花粉通过B缓冲液处理后，可以直接作为流式细胞仪倍性鉴定的材料，不再需要其他处理，配制的Y裂解液可以得到较好的试验结果。
关键词： 甘蓝（Brassica oleracea var. capitata） 流式细胞仪 花粉 测定 倍性 裂解液
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三株无量山森林土壤芽孢杆菌鉴定及其生物活性挖掘
《生物技术通报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]挖掘无量山国家自然保护区潜在的高活性微生物菌株,旨在为农业绿色投入品研发提供高效的菌种资源.[方法]以番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)为靶标筛选高拮抗活性菌株,观察对菌丝生长的影响,测定对孢子萌发的抑制作用;检测脂肽类化合物合成基因以及菌株体外产酶、解磷、解钾、固氮及产铁载体能力;结合形态学、生理生化特征和 16S rRNA、gyrA、rpoB基因进行菌株鉴定,室内盆栽试验验证防病和促生效果.[结果]分离筛选获得 153 株可培养细菌,其中,菌株SH-53、N4471 和N9456 抑菌效果分别为 92.35%、87.29%和 88.47%,能抑制病原菌菌丝生长和分生孢子萌发,且对多种病原菌表现出良好拮抗活性.3 株功能菌均具有溶锌、产淀粉酶和蛋白酶的能力,菌株SH-53 和N4471 还具有解磷、固氮、分泌纤维素酶以及产铁载体能力.3 个功能菌基因组中均含有srfA、fenA、ituA、ituC、ituD、bymC等脂肽类化合物合成基因.经鉴定菌株SH-53 为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),N4471 为卡式芽孢杆菌(B.cabrialesii),N9456 为暹罗芽孢杆菌(B.siamensis).盆栽试验结果表明,3 株功能菌防效分别为 84.66%、54.96%和 59.74%,对番茄幼苗的株高、茎粗、根长等农艺性状均具有较好促进作用.[结论]3 个菌株具有高效、广谱的抑菌活性,具有多样化的生物活性,作为高效的微生物资源具有广阔的应用前景.
关键词： 解淀粉芽孢杆菌 卡式芽孢杆菌 暹罗芽孢杆菌 鉴定 生物活性 番茄枯萎病 促生
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云南滇黄精根茎腐病病原菌种类鉴定
《云南农业科技 》 2024
摘要：为明确云南省滇黄精根腐病的主要病原菌种类，采用组织分离法分离主要病原菌，并基于形态学结合分子生物学方法鉴定，通过科赫氏法则验证其致病性。结果表明，从云南省8州(市)6县(区)63份典型病害样本分离培养纯化获得4种真菌，确定云南滇黄精根茎腐病主要病原菌为Colletotrichum kingianum、Fusarium solani、Fusarium foetens和Fusarium concentricum,其分离频率分别为51.43%、26.67%、20.00%和1.90%;其中，轮纹镰孢菌能引起滇黄精根茎腐病在国内属首次报道。研究结果可为滇黄精根茎腐病的科学防治提供依据。
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云南柑橘5种常见病害发生分布调查及其规律分析
《园艺学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为明确黄龙病菌（“Candidatus Liberibacter asiaticus”,CLas）、柑橘黄化脉明病毒（citrus yellow vein clearing virus,CYVCV）、柑橘碎叶病毒（citrus tatter leaf virus,CTLV）、柑橘裂皮类病毒（citrus exocortis viroid,CEVd）和柑橘衰退病病毒（citrus tristeza virus,CTV）所引起的柑橘病害在云南省的发生和分布情况，广泛收集了该省柑橘14个主产州、市38个县的577份柑橘叶片样品，采用巢式PCR和RT-PCR对以上5种病原进行检测，并通过遗传进化分析构建系统发育树。结果表明，CLas、CYVCV、CTLV、CEVd、CTV检出率分别为36.0%、33.6%、15.1%、13.0%、82.0%，其中CLas和CTV在14个供检州、市中均被检测到。从种类上看，CYVCV、CLas和CTV的检出率均为甜橙>宽皮柑橘>柠檬，其中CTV在柠檬中的检出率（40.0%）明显低于宽皮柑橘（87.4%）和甜橙（92.2%），而CTLV和CEVd在甜橙中的检出率最低，分别为5.9%和4.0%；从海拔上看，CLas的发生与海拔呈现出一定的负相关。此外，不同病害之间存在一定的相关性，CYVCV与CTV、CTLV与CEVd经常存在复合感染的情况，而CLas与CEVd同时侵染的概率较低。通过遗传进化分析发现，云南柑橘病害病原的异地引入和内部传播均为病原扩散的重要途径。
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基于全基因组测序一株自然形成的耐链霉素果胶杆菌NJAU2的分离鉴定
《植物病理学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：果胶杆菌属（Pectobacterium）是导致全球农作物经济损失的重要病原细菌之一，抗生素抗性菌株的产生加大了该病害的防控难度。本研究以不同寄主植物分离获得的果胶杆菌为材料，利用平板分析，获得一株野外形成的链霉素抗性菌株。通过基因组测序及比较基因组研究，明确其分类地位，并预测链霉素抗性基因。研究表明，自不同寄主分离的8个菌株中，云南黄花马蹄莲发病株获得的NJAU2,对链霉素存在高度抗性。NJAU2基因组总长5 062 459 bp, GC含量51.83%,N50长度306 378 bp,共有4 568个编码基因。基于果胶杆菌8个管家基因（fliA、fusA、glyA、gyrB、purA、rpoA、rpoS和secY）的MLSA多位点序列分析结果显示NJAU2与标准菌株P.aroidearum SCRI 109T及已报道的菌株P.aroidearum PC1聚类在同一个分支，该结果与基于16S rRNA基因序列构建的系统发育关系一致，进一步NJAU2与各果胶杆菌的平均核苷酸一致性（ANI）、DNA-DNA杂交（isDDH）分析也支持这一结果。为此，将自然形成的链霉素耐性菌株NJAU2归属于果胶杆菌的新种：Pectobacterium aroidearum,命名为Pectobacterium aroidearum NJAU2。NJAU2的基因组中携带编码链霉素耐药基因集。抗生素耐药性综合数据库（CARD）比对发现NJAU2含有与7类耐药相关的328个耐药基因。此外，NJAU2基因组注释表明：其含有15个编码氨基糖苷类抗生素抗性基因，其中与链霉素抗性相关的基因有rpsL和gidB。马蹄莲软腐病病原菌NJAU2的发现，为果胶杆菌在链霉素抗性方向的研究提供了新材料。
关键词： Pectobacterium aroidearum NJAU2 鉴定 链霉素抗药性 基因组分析 抗性基因
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美国引进甘蔗热带种的ARMS PCR真实性鉴定
《中国糖料 》 2023
摘要：甘蔗遗传基础狭窄已经极大地阻碍了其育种进程,挖掘优异种质资源、创新亲本材料将成为未来甘蔗育种的重要方向之一.利用四引物扩增受阻突变PCR体系(ARMS PCR)对国家甘蔗种质资源圃保存的美国引进的 24 份疑似热带种材料进行真实性鉴定.PCR鉴定结果表明,供试材料中有'Green German'、'Black Fiji'、'Chittan'、'IN 84-072'和'NG 21-002'这 5份材料扩增带型与热带种'拔地拉'(Badila)一致,仅出现 428 bp的共有条带和 278 bp的热带种特有条带,属于热带种带型;而其它 19 份材料同时具有 278 bp的热带种特有条带和 203 bp的割手密特有条带,属于热带种与割手密的杂交种带型.经过上述分子鉴定得出结论,24 份美国引进的甘蔗种质中有'Green German'、'Black Fiji'、'Chittan'、'IN 84-072'和'NG 21-002'这 5 份材料为热带种材料,建议后续加强其农艺性状和抗性调查,并作为甘蔗热带种新血缘亲本进行杂交利用.
关键词： 甘蔗热带种 ARMS PCR 真实性 鉴定 甘蔗育种
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基于生长年限对白及类药材militarine成分的积累影响研究
《中华中医药学刊 》 2023 北大核心
摘要：目的 探讨不同生长年限的白及、小白及和黄花白及药材中1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯(militarine,化学式为C_(34)H_(46)O_(17))成分的积累规律，为白及质量控制和近缘种资源的开发提供依据。方法 采用HPLC法，以XTerra Waters柱(5μm, 4.6 mm×250 mm)为色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78)进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min,检测波长270 nm,测定各样品militarine的含量。结果 经过对HPLC图谱分析比较，不同生长年限的白及与其2种近缘种的militaeine成分含量差别较大，以4年生最高，3年生的次之，2年生则最低，相同生长年限的种间含量稍有差异，白及稍高，小白及与黄花白及稍低。结论 以3年及以上生长年限的白及作为药材原料具有一定的科学性。小白及、黄花白及与生长年限相同的白及的militarine含量相当，二者作为习用品具有一定的合理性，可为开展深入的资源评价提供参考依据。
关键词： 白及 近缘种 生长年限 HPLC Militarine 含量分析
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番茄环纹斑点病毒核衣壳蛋白N的RT-LAMP检测方法的建立
《山东农业科学 》 2023 北大核心
摘要：番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)属正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus),严重影响番茄、辣椒等作物的产量及经济价值.本研究根据TZSV的核衣壳蛋白N的基因序列设计逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)反应引物,建立了TZSV的RT-LAMP检测方法.结果显示,该方法能够特异扩增TZSV,与侵染辣椒的番茄斑萎病毒和烟草花叶病毒不发生反应;RNA最低检测限为 0.01 pg/μL,灵敏度为普通逆转录PCR(RT-PCR)的 10 倍;田间样品检测应用结果表明,RT-LAMP扩增和可视化检测结果与RT-PCR一致.综上,本研究建立的RT-LAMP快速检测方法可有效应用于TZSV的田间检测.
关键词： 番茄环纹斑点病毒 核衣壳蛋白N 逆转录环介导等温扩增技术 检测
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云南龙陵地区产紫皮石斛和铁皮石斛中9种功能活性物质测定及鉴别研究
《现代食品 》 2023
摘要：建立了超声冰浴辅助提取,超高效液相色谱-串联质谱法同时测定紫皮石斛和铁皮石斛中9种活性化合物的分析方法.本方法快速简便、灵敏度高,样品经甲醇-水溶液冰浴下超声提取后,采用超高效液相色谱-串联质谱多反应监测模式正负离子同时扫描进行测定.该方法在 0.001~10.000 μg·mL-1 线性关系较好,定量限为0.025~0.250 mg·kg-1,平均加标回收率为 70.4%~79.2%,相对标准偏差为 4.27%~7.48%.PCA分析结果表明产自相同地区的紫皮石斛和铁皮石斛能够被有效鉴别.柚皮苷、芹菜素、圣草酚、香草酸和紫丁香苷特征活性化合物在紫皮石斛和铁皮石斛中的含量差异较大(P<0.01),且VIP值都大于1.柚皮苷在紫皮石斛中有检出,但在铁皮石斛中未检出,可以作为鉴别紫皮石斛和铁皮石斛的关键特征指标.
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