科研产出
月季SSR反应体系的优化
《西南大学学报(自然科学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以月季品种‘月月粉’为试材,利用CTAB法提取DNA,对影响SSR-PCR扩增体系的主要因子设计了多梯度的优化实验,建立了适用于月季的SSR反应体系:总反应体积为25μL,包括模板DNA溶液(20 ng/μL)2μL,10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0μL,dNTPs(10 mM)0.5μL,正反引物各(10μmol/L)1μL,TaqDNA聚合酶(5 U/μL)0.3μL.利用该优化体系对部分月季品种进行PCR扩增和电泳检测,扩增结果清晰且有较高的多态性,表明该体系适合用于分析月季的遗传多样性.
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月季MYB基因cDNA全长克隆和表达分析
《中国农业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆月季花色代谢相关新基因的全长cDNA序列,并分析其表达功能。【方法】根据月季花色突变体SSH文库分析得到的差异表达EST序列设计引物,采用RACE技术进行全长cDNA克隆。【结果】克隆到1 125 bp的cDNA全长,GenBank登录号为Eu082130。这一cDNA序列编码1个包含294个氨基酸的前体蛋白,它与小金海棠MxMYB1和大豆的GmMYB176蛋白的保守区同源性分别为70%和58%,都是只有1个MYB结构;而与具有两个MYB结构域的棉花GhMYB26、拟蓝芥AtMYB305和金鱼草AmMYB340同源性很低。该蛋白的分子量为32.33 kD,等电点为9.65,分子式为C1387H2201N435O440S10。半定量PCR分析证实了该RhMYB1基因与CHS基因在红花突变体中比在黄花亲本中表达量高。【结论】推测该基因是一个转录因子,参与调控花青苷的合成。
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月季花瓣的RNA提取方法
《云南农业大学学报 》 2007 CSCD
摘要：以富含类黄酮的月季花瓣为试验材料,通过比较不同方法,优化和改进提取步骤,发现CTAB多级沉淀法、改良异硫氰酸胍法提取的RNA的完整性和纯度较好,电泳显示28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S的两倍。而SDS-LiCl法、RNArose Reagent试剂快速法提取的RNA黄酮胶状沉淀难溶,电泳图谱28S和18S条带模糊难辨,5S条带很亮。这为月季花色差减文库构建及花色相关基因克隆奠定了良好的基础。
关键词： 月季 花瓣 RNA提取 CTAB-多级沉淀法
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5个切花月季品种的叶片离体培养和再生能力的基因型效应
《西南大学学报(自然科学版) 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：以5个切花月季品种的试管苗叶片为外植体,研究了叶片直接和间接再生2种途径,结果表明:5个品种的叶片再生能力相差较大,直接再生率由高到低排序为卡罗拉(56.1%)、沃蒂(55.6%)、坦尼克(51.6%)、维西利亚(45.0%)、巴比伦(35.2%);愈伤组织诱导率、间接分化率的排列顺序与直接再生率基本相同.上述研究可得出基因型对再生能力具有如下调控效应及特点:不同基因型对培养基种类及植物生长调节剂的要求,对脱分化与再分化能力的调控,对不同组织、器官的再生能力的调控均具有同一性;但不同基因型、甚至同一基因型的不同组织、器官还具有一定的特异性.
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月季突变体抑制差减杂交cDNA文库构建及分析
《园艺学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：为了分析月季花色花香突变机理和揭示花色花香代谢的相关基因,利用抑制性消减杂交技术分离了月季红花无香突变体‘往日情怀’(以下简称突变体)与其野生型金黄色浓香品系‘金银岛’(以下简称野生型)之间表达差异cDNA片段。分别以突变体作为驱赶子,野生型为检测子,以及以野生型作为驱赶子,突变体为检测子建立了两个差异表达cDNA文库WSSH和JSSH,分别代表在突变体和野生型中特异表达的cDNA;再经文库高密度点阵膜的杂交差示筛选分析,在WSSH库中获得特异表达的27个阳性克隆,在JSSH文库中得到25个阳性克隆。差异表达克隆测序后经BLAST比对分析发现WSSH文库中含有与红花突变体的花青素积累直接相关的CHS、DFR、细胞色素P450加单氧酶、乙二醛酶Ⅰ、己糖转移因子、MYB1转录因子、S-腺苷蛋氨酸转移酶、ADR等花色相关EST;JSSH文库中含有与野生型花香形成相关的月季甲基间苯二酚O-甲基转移酶、转醛醇酶、Acyl-CoA结合蛋白、钙调素结合蛋白、MYB92转录因子的EST以及导致芽变的Ty1-copia-like逆转座子。
关键词： 月季 抑制性消减杂交 花色 花香 突变体 差异表达
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DNA分子标记在月季中的应用
《西南农业学报 》 2006 CSCD
摘要：遗传标记的发展促进了植物遗传育种的研究,DNA分子标记是继形态标记、细胞学标记、生化标记之后发展起来的一种新的更为理想的遗传标记,它在月季遗传育种研究方面发挥了重要作用。DNA分子标记包括限制性片断长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增片断长度多态性(AFLP)、简单重复序列(SSR)、单核苷酸多态性(SNP)等。对DNA分子标记的分类、原理、特点及其在月季亲缘关系分析、基因定位、品种鉴定和遗传图谱的构建等方面的研究进行概述。
关键词： 月季 分子标记 RFLP RAPD AFLP SSR SNP
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